张辉

研究表明，长链非编码 RNA（LncRNA）能通过募集多梳蛋白复合物并使其定位到HOXD 基因位点，从而促进乳腺癌的发生与发展[1]。HOX 转录反义RNA（HOTAIR）是一种反式LncRNA，在乳腺癌组织中处于高表达状态，且与肿瘤细胞转移有关[2]。microRNA 是一类较短的非编码RNA分子，在直肠癌组织中，miR-124 可通过抑制信号传导抑制肿瘤的生长。研究表明，miR-124 在乳腺癌组织中表达水平较低，可能与患者病情进展有关[3]。本研究拟观察LncRNA HOTAIR/miR-124 参与乳腺癌细胞转移的调控情况，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2018 年2 月至2020 年3 月浙江省温州市中医院收治的行乳腺癌切除术患者87 例，纳入标准：（1）既往无放、化疗史，无免疫及内分泌治疗史；（2）临床资料完整；（3）患者及家属对本次研究知情，并自愿签订知情同意书。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤或血液系统疾病者；（2）孕产妇；（3）HIV 阳性者；（4）精神疾病患者。收集患者肿瘤组织及癌旁组织，并经病理学检查确诊为乳腺癌。其中年龄33 ～73 岁，平均（52.3±12.7）岁；TNM 分期[4]为Ⅰ期36 例，Ⅱ期28 例，Ⅲ期14 例，Ⅳ期9 例。

1.2 方法

1.2.1 细胞株与主要试剂 人正常乳腺上皮细胞 MCF-10A、乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231 及T-470（上海钰博生物科技有限公司）；Trizol 试剂（Thermo Fisher）；山羊抗小鼠IgG（qRTPCR）试剂盒（美国Ambion 公司）；miR-124 逆转录引物（上海海方生物技术有限公司）；细胞增殖测定试剂盒CCK8（吉满生物科技有限公司）；E-cadherin、Vmentin、Snail、Slug、Zebl、SP1、GAPDH-抗（美国Abcam公司）；Invasion和Migration试剂盒（美国Cell Biolabs）。

1.2.2 RT-qPCR测定 乳腺癌组织及癌旁组织按照试剂说明书提取组织总RNA 并溶于20 l DEPC 水中，－80℃冷藏备用。采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA，采用RT-qPCR 法测定HOTAIR和miR-124表达情况。HOTAIR表达水平测定：选择组织和血清中稳定表达的-actin 作为内参，HOTAIR 引物及-actin 由Primer5 软件进行设计，经BLAST 比对后进行合成。……