孔凡荣

(锦州市中心医院 消化一科,辽宁 锦州121000)

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌最常见的类型，大约占所有原发性肝癌的70%-90%[1-3]。HCC的早发现、早治疗是提高患者生存率的关键要素。Jianjun Zhu等发现，肿瘤坏死因子α(TNFα)能够通过瞬时受体电位通道促使Ca2+从细胞外流入细胞内，从而激活钙蛋白酶/IAP/caspase3 信号通路促进HCC细胞凋亡[4]。Hang X等发现NEDD4基因沉默将导致磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达增加，从而使STAT3、AKT和ERK1/2表达失活，最终抑制HCC细胞生长[5]。Zhang G等实验表明MAGI1能够通过上调PTEN表达从而抑制HCC细胞的迁移和侵袭[6]。本试验通过检测HCC患者TNFα与PTEN表达水平，分析二者在HCC中的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 组织获取

选取锦州市中心医院2017年10月-2019 年10月HCC病人(所有病人均为男性，年龄40岁±2.0岁)30例。取癌区、癌旁区(距癌边缘2-5 cm)组织标本，分别记为CT(carcinoma tissue)组和PCT (para-carcinoma tissue)组。所有标本均经病理学检查证实。

1.2 定量PCR(qRT-PCR)试验

根据试剂盒说明书(Ambion,Austin,TX,USA)，使用Trizol裂解液提取样本总RNA，并且逆转录合成 cDNA。PTEN基因的PCR反应总体系25 μl，反应条件为：95℃ 12 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 45 s，共40个循环。TNFα基因的PCR反应总体系25 μl，反应条件为：94℃ 5 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共40个循环。基因引物序列见表1。PCR产物置于1.5%琼脂糖凝胶电泳，并且使用Quantity One Imager version 4.6.2 (Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)对图像进行分析。同时，选取甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参。

表1 基因引物信息

1.3 癌组织TNFα与PTEN基因表达水平与HCC临床病理因素的关系

利用PCR技术分别检测癌组织TNFα与PTEN基因表达水平。同时，分析TNFα与PTEN基因表达与癌组织分化和卫星灶的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，计量资料表示为均数±标准差(means±SD)。采用t检验对两组数据进行比较，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNFα与PTEN mRNA表达水平

结果表明，与PCT组比较，CT组PTEN和TNFα mRNA表达水平均明显降低(图1、图2)。

2.2 癌组织TNFα与PTEN基因表达水平与HCC临床病理因素的关系

低分化HCC TNFα与PTEN基因表达水平明显低于高、中分化HCC，有卫星灶HCC TNFα与PTEN基因表达水平明显低于无卫星灶HCC，差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

2.3 PTEN和TNFα相关性分析

PTEN和TNFα呈正相关(r=0.47,P<0.05)。

图1 TNFα基因PCR扩增产物电泳结果

图2 PTEN基因PCR扩增产物电泳结果

表2 TNFα与PTEN基因表达水平与HCC临床病理因素的关系

3 讨论

HCC是一种严重威胁人类健康的疾病，也是癌症相关死亡第三常见的原因[2,7]，随着环境的恶化和乙/丙肝病毒传染率的增加，HCC的发病率逐年升高[8]。研究表明，HCC具有特定的流行病学特征，包括动态的时间趋势、地理区域、种族和族群之间的显著变异、性别差异和环境潜在危险因素[9]。虽然手术、放疗和化疗等已经被广泛用于HCC的治疗，但是其预后依旧较差[8]。此外，HCC术后高的复发率和远处转移率使得其5年生存率保持较低水平[10]。因此，HCC的早诊断和早治疗，成为了缓解其症状，并且大幅改善其预后的有效措施。研究表明，TNFα是一种特异性的高效抗癌剂，可以对抗多种肿瘤[11]。Li D等发现生存素失活能够促发TNFα的协同致死作用，从而引起HCC细胞的死亡[12]。PTEN基因突变或沉默与多种肿瘤的发生密切相关[13-14]。PTEN基因表达下调将导致肿瘤血管生成，从而促进肿瘤的增殖和发生[15]。本研究分别测定HCC癌组织和癌旁组织的TNFα和PTEN基因表达水平。结果表明，HCC癌组织TNFα和PTEN基因表达水平明显低于癌旁组织。同时，病理分析结果显示，癌组织TNFα和PTEN基因表达水平越低，HCC分化越低，卫星灶转移率越高。此外，相关性分析结果显示，PTEN和TNFα表达呈正相关。检测TNFα和PTEN基因表达水平将有助于对HCC恶性程度和转移潜能的评估和预测，对HCC患者的早期诊断和治疗有着重要的意义。