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重组酶快速检测十足目虹彩病毒1方法的建立

2021-03-25尹伟力刘晓静马晓玲吴宁宁陈燕平

水产科学 2021年2期
关键词:检测方法

尹伟力,吴 葳,刘晓静,马晓玲,韩 伟,吴宁宁,陈燕平

(1.烟台海关技术中心,山东 烟台 264000;2.武汉农业检测中心,湖北 武汉 430016;3.荣成海关,山东 荣成 264300;4.上海医药集团 青岛国风药业股份有限公司,山东 青岛 266000;5.青岛海关技术中心,山东 青岛 266000)

2014年9月,浙江省养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)暴发了一种高死亡率的新疫病,患病虾出现虾壳变软、颜色变淡,空胃,伴随肝胰腺萎缩[1]。经中国水产科学研究院黄海水产研究所研究表明,这种疾病是由一种新发现的虹彩病毒引起的,命名为十足目虹彩病毒1(Decapodiridescentvirus1,DIV1)[2-3],旧称为虾血细胞虹彩病毒(SHIV)。对主要衣壳蛋白(MCP)和ATP酶的氨基酸序列分析,该病毒属于虹彩病毒科下的一个新属[4]。流行病学调查结果显示,十足目虹彩病毒1也可感染中国明对虾(Fenneropenaeuschinensis)和罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)[5-6]。近年来,该病已蔓延至我国沿海部分地区,并有加速扩散趋势,若未有效防控,将成为严重影响我国虾类养殖业发展的疫病之一。

虾类疫病的传统检测方法是PCR[7],但该方法需要专用扩增仪器,不适合基层及现场快速检测。近来,愈来愈多操作简便、检测周期短的分子生物检测技术广泛应用于十足目虹彩病毒1,其中,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)发展较为迅速。该技术无需造价高昂的升降温仪器,在恒温条件下20 min内即可完成核酸扩增,反应快速而灵敏,扩增产物可以通过构建荧光探针法进行实时定量检测,也可以与DNA芯片、琼脂糖凝胶电泳、侧流层析试纸条等多种检测技术相结合进行检测[8-10],适合基层实验室及一线口岸的现场检测。……

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