李培勇

[摘要] 目的 探究生殖支原體对男性精液参数的影响。 方法 选择2018年4月至2020年4月在本院进行不育症治疗的患者160例作为研究对象。全部患者均采集精液样本，使用核酸扩增技术检测精液样本中有无生殖支原体感染，同时利用计算机系统分析全部精液样本参数，通过Shorr染色技术观察精子形态，并对精浆中γ-L-谷氨酰转肽酶活性、果糖、α-葡糖苷酶以及锌水平进行检测。观察全部患者中生殖支原体阳性感染例数及阴性例数，比较阳性感染者与阴性者的一般资料;比较生殖支原体阳性感染者与阴性者精浆指标及精液样本参数。 结果 160例患者中，生殖支原体检测显示阳性感染者80例、阴性者80例，阳性感染组与阴性组患者在年龄及不育时间方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）;两组患者γ-L-谷氨酰转肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及锌水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;阳性感染组患者精液量、精子浓度、精子活力及形态正常精子水平均低于阴性组，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 生殖支原体感染可降低精液量、精子浓度、精子活力及形态正常精子水平，因此需在诊断后及时采取有效措施进行治疗。

[关键词] 精液参数;生殖支原体;不育症;核酸扩增技术;精液量

[中图分类号] R697          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2021）03-0104-04

The influence of Mycoplasma Genitalium on semen parameters

LI Peiyong

Department of Reproductive Andrology， the First Affiliated Hospital of Xiamen University， Xiamen   361000， China

[Abstract] Objective To explore the influence of Mycoplasma Genitalium on semen parameters in males. Methods A total of 160 patients receiving treatment for infertility in our hospital were selected as study samples， and the study duration was from April 2018 to April 2020. Semen samples were collected from all the patients， and were detected by nucleic acid amplification technology for the presence of Mycoplasma Genitalium infection， and were analyzed by computer system for their parameters. Spermatozoa morphology was observed by Shorr staining， and γ-L-glutamyl transpeptidase activity， fructose， α-glucosidase， and zinc levels in seminal plasma were detected. The number of positive mycoplasma genitalium infections and that of negative Mycoplasma Genitalium infections in all patients were observed and the general data of positive and negative infections were compared; seminal plasma indexes and semen parameters were compared between positive and negative patients with Mycoplasma Genitalium. Results Of the 160 patients， 80 were tested positive and 80 were tested negative， and there was no significant difference in age and infertility time between the positive infection group and the negative group（P>0.05）. There was no significant difference in γ-L-glutamyl transpeptidase， fructose， α-glucosidase and zinc between the two groups（P>0.05）; the semen volume， sperm concentration， sperm motility and level of morphologically normal sperm of patients in the positive group were lower than those in the negative group， with significant differences（P<0.05）. Conclusion Mycoplasma Gentiformis infection reduces the semen volume， sperm concentration， sperm motility and level of morphologically normal sperm. Therefore， effective treatment should be given in time after diagnosis.

[Key words] Semen parameters; Mycoplasma Genitalium; Infertility; Nucleic acid amplification technology; Volume of semen

不育症指正常育龄期夫妇正常性生活1年或更长时间，未采取避孕措施出现未生育的情况[1]。临床有研究显示，已婚夫妇出现不育症者占15%[2]，并且男性不育症发病率达到30%。随着临床对不育症研究的不断深入，发现生殖道感染在导致不育症的原因中最为常见，近年来随着性传播疾病发病率的升高，生殖道感染性疾病发病率也逐渐升高，并且疾病严重程度也明显增加，对男性生育能力产生严重影响。生殖支原体是全部支原体中基因组最小的一种，生殖支原体由于分离难度较大，因此无法进行培养检测。当前，临床有报道显示[3]，男性感染生殖支原体后会导致精液质量有显著降低，并且还可发生不育症，对男性生育功能产生不利影响，但目前临床对这一说法尚未形成统一结论。因此，本研究对本院治疗的不育症男性患者160例进行精液质量检查，探讨精液质量与生殖支原体感染之间关系，现报道如下。

1 资料及方法

1.1 一般资料

选择2018年4月至2020年4月本院治疗的不育症患者160例作为研究对象，年龄24～45岁，平均（32.22±2.98）岁。纳入标准[4]：①正常性生活≥1年且未进行任何避孕措施者;②患者及其家属知情同意，在充分了解研究目的及研究方法后表示自愿参加研究。排除标准[5]：①患有全身性感染疾病者;②近期有外伤史者;③存在精索静脉曲张、附睾结核及先天性性腺发育不良等疾病者;④有家族遗传病史者;⑤存在严重认知功能障碍，无法正常进行言语交流者;⑥肝肾功能有明显异常者;⑦不配合研究者;⑧女性因素导致不孕症者。由于其他类型生殖道感染会对精子质量产生一定影响，因此在进行精子参数比较时将有沙眼衣原体、淋病奈瑟菌及解脲支原体感染的患者排除。本研究经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2 方法

指导全部患者在检查前3～7 d禁欲，检查时使用新洁尔灭消毒剂棉球对尿道口、阴茎头及双手进行消毒，之后再使用含有无菌生理盐水的棉球对消毒部位再次擦拭，通过手淫的方式采集精液，并放置在无菌容器盒中，精液采集后立即放置在37℃水浴箱中液化。精液液化后，使用移液器吸取100 μL精液至标本保存管中，震荡混匀，放置在-20℃环境中保存，进行支原体检测样本采集;吸取2.0 mL精液进行精子质量检测;剩余精液样本置于3000 r/min的离心机中进行持续10 min的离心处理，并分离精浆，对精浆进行生化检测。对精液样本进行生殖支原体检测时，使用生殖支原体PCR检测试剂盒（上海仁度生物科技有限公司）、实时荧光恒温扩增检测仪（济南君意生物科技有限公司），全部操作均严格依据试剂盒使用说明进行。操作步骤包括，分别设定阳性及阴性对照，选择400 μL含有样本保存液的精液样本及100 μL核酸提取液，将其充分混合均匀后放置在60℃恒温环境中反应5 min，随后放置在室温环境下10 min，最后置于磁珠分离器上进行5 min静置处理，丢弃液体，分别添加2次洗涤液进行洗涤，保留与磁珠结合的RNA，随后添加40 μL核酸反应液。将其中30 μL转移至PCR反应试管中，首先放置在60℃环境中持续反应10 min，之后放置在42℃环境中持续反应5 min，最后添加42℃预热的SAT酶，在42℃环境中实时恒温扩增40 min;扩增后出现的RNA拷贝和优化的探针进行特异性结合并出现荧光信号，利用检测仪分析荧光信号。使用精浆生化检测试剂盒（深圳市博锐德生物科技有限公司）进行精浆检测，其中γ-L-谷氨酰转肽酶活性及α-葡糖苷酶通过速率法进行检测，锌则通过1-（2-吡啶偶氮）2-萘酚法进行检测，将95%CI作为判断正常参考范围的标准;果糖通过已糖激酶法进行检测，其参考范围主要是通过对100例正常男性精浆样本进行检测，观察第5百分位数进行确定。γ-L-谷氨酰转肽酶该批次内变异系數≤8%，批次间变异系数≤10%;果糖批次内变异系数≤5%，批次间变异次数≤7%;α-葡糖苷酶批次内变异系数≤7%，批次间变异系数≤8%;锌批次内变异系数≤7%，批次间变异系数≤8%。采用精子质量分析仪（徐州市宝兴医疗设备有限公司）对精子质量进行检测。通过Shorr染色技术观察精子形态，该项措施由实验室专业人员进行人工操作。

1.3观察指标

观察所有患者精液样本中生殖支原体感染情况，并分析阳性感染者与阴性者的一般资料，主要包含年龄及不育时间。比较生殖支原体阳性感染者与阴性者精浆指标及精液样本参数，其中γ-L-谷氨酰转肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及锌属于精浆指标，精液量、精子浓度、精子活力及形态正常精子属于精液样本参数。

1.4统计学方法

应用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验;计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

在160例患者中，有80例（50.00%）出现生殖支原体感染，有80例（50.00%）检测结果呈阴性。阳性感染组与阴性组患者在年龄及不育时间方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 两组精浆指标及精液参数比较

两组患者在γ-L-谷氨酰转肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及锌水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;阳性感染组患者精液量、精子浓度、精子活力及形态正常精子水平均低于阴性组，两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3讨论

生殖支原体于1981年从非淋菌性尿道炎男性患者中被分离出来，但是受到分离培养困难及生殖支原体致病性有待证实等因素影响，临床对此研究较少;直至1985年通过进行聚合酶链式反应的DNA扩增技术，使得临床对生殖支原体的关注度大大提升[6]。生殖支原体是人类泌尿生殖道感染潜在的病原体，同时也是人类泌尿生殖道感染的重要原因之一。随着临床对生殖支原体研究的不断深入，有研究显示，其在导致男性不育症方面可能与其从多个层面直接或间接对生殖器官造成损害有关，进而阻碍精子发育及成熟、堵塞精子运输通道，进一步使机体出现抗精子抗体、降低精子运动功能[7]。但也有研究结果显示，生殖支原体导致男性不育症可能是由于感染生殖支原体后，其可依附在精子表面，从而降低精子活性，最终导致不育症[8]。鉴于此，临床将探讨精液质量与生殖支原体感染之间的关联性作为研究重点。

γ-L-谷氨酰转肽酶在谷胱甘肽代谢过程中发挥重要作用，其可保护精子免遭氧化应激反应的损伤[9]。α-葡糖苷酶检测是临床男性常规检测项目，检测其水平可反映附睾分泌能力[10]。本研究中，阳性感染者与阴性者在γ-L-谷氨酰转肽酶、α-葡糖苷酶、果糖及锌水平方面均无显著差异，对于生殖支原体感染是否影响精浆生化指标还需临床进一步研究。朱来晴等[11]的研究结果显示，生殖支原体感染者的精液量为（3.20±1.30）mL，未感染者精液量为（3.57±1.36）mL，因此其认为男性感染生殖支原体后会导致其精液量下降，进而影响其生育功能。本研究中，阴性组患者精液量为（3.68±1.09）mL，显著高于阳性感染组的（3.11±1.01）mL;阳性感染组精子浓度为（50.79±16.92）×106/mL，显著低于阴性组的（56.88±17.01）×106/mL;阴性组患者精子活力为（45.98±13.22）%，显著高于阳性感染组的（41.67±12.88）%;阴性组患者形态正常精子水平为（5.82±1.92）%，显著高于阳性感染者的（5.25±1.55）%（P<0.05）。分析结果可知，正常精液属于黏稠状液体混合物，主要由精浆及精子构成，其中精浆占比超过90%。在精浆中含有丰富的蛋白质、果糖、多肽、水、无机盐、前列腺素、葡萄糖及有机小分子物质，可为精子提供营养和能源[12]。但当机体感染生殖支原体后，支原体会吸附在精子的头、体及尾各段，直接影响精子活力，精子吸附大量支原体后，则会丧失运动能力，导致大量精子黏连，影响精子质量;由于炎症影响会导致精液量下降，无法为精子发育提供充足营养，导致精子活力下降，对男性生育功能产生不利影响[13-15]。由于RNA在环境中极不稳定，并且在支原体死后可快速降解，通过对RNA保存液进行实时荧光核酸恒温扩增检测技术检测，可一定程度上避免RNA降解，同时经该技术检测到的生殖支原体水平则代表处于存活状态的生殖支原体，可协助医师准确掌握患者机体内生殖支原体水平，对于判断临床用药效果具有积极意义[16-17]。

综上所述，生殖支原体感染会导致精液量显著下降，对精液质量产生不利影响。但本研究存在样本量较少、研究时间较短等问题，因此还需后续扩大样本量及延长研究时间来做进一步研究。

[参考文献]

[1] Qian YC，Xie YX，Wang CS，et al.Mkrn2 deficiency induces teratozoospermia and male infertility through p53/PERP-mediated apoptosis in testis[J].Asian Journal of Andrology，2020，22（4）：414-421.

[2] 邵丽佳，朱德胜，陈伟，等.MTHFR C677T基因、血清同型半胱氨酸与特发性男性不育症的关系研究[J].浙江医学，2019，41（10）：1013-1016，1020.

[3] 闫泽晨，商学军，刘玮，等.生殖支原体感染对男性不育患者精液质量的影响[J].中华男科学杂志，2018，24（4）：317-321.

[4] 梁嘉颖，郑毅春，张杰，等.应用单层和双层密度梯度离心法处理男性不育症患者精液效果对比[J].实用医学杂志，2019，35（20）：3182-3187.

[5] 刘利敏，谢庆东，凌晓辉，等.精浆ROS、PON-1、MDA联合精子DNA碎片指数在男性不育症患者中的研究[J].国际检验医学杂志，2019，40（12）：1435-1438.

[6] 石华，欧阳斌，黄亮亮，等.RNA恒温扩增技术检测沙眼衣原体、生殖支原体及解脲支原体在男科门诊中的临床价值[J].中国性科学，2019，28（7）：138-141.

[7] Ribas-Maynou J，Yeste M.Oxidative stress in male infertility：Causes，effects in assisted reproductive techniques，and protective support of antioxidants[J].Biology，2020，9（4）：77.

[8] Ajuogu PK，Al-Aqbi MAK，Hart R.The effect of dietary protein intake on factors associated with male infertility：A systematic literature review and meta-analysis of animal clinical trials in rats[J].Nutrition and Health，2020， 26（1）：53-64.

[9] 张永红，夏良海，方师群.男女性泌尿生殖系统支原体感染者支原体类型差异及药敏动态分析[J].中华实验和临床感染病杂志（电子版），2018，12（2）：123-127.

[10] 刘鹏，孙建明，迟令侃，等.特发性少弱精患者精浆α-葡糖苷酶、锌与精子形态学参数相关性分析[J].國际检验医学杂志，2017，38（16）：2185-2187.

[11] 朱来晴，汪珣，孙国海，等.生殖支原体感染对不育男性精液相关参数的影响[J].中华男科学杂志，2018，24（10）：903-906.

[12] 张剑波，尹国良，徐新蓉，等.男性泌尿生殖道支原体和衣原体感染对精液质量影响与不育关系分析[J].中国优生与遗传杂志，2016，24（2）：120-121.

[13] 叶莎.分析泌尿生殖道支原体感染情况及药敏分析结果[J].检验医学与临床，2019，16（19）：2807-2810.

[14] 王宏波，王宇鹏，李皇庆，等.长沙地区1409例泌尿生殖道支原体感染者的感染状况及药敏分析[J].中国微生态学杂志，2020，32（2）：172-175，179.

[15] 黄秀荣.生殖支原体与泌尿生殖道疾病的研究进展[J].检验医学与临床，2019，16（10）：1444-1447.

[16] 李哲铭，刘冬冬，陈攀，等.谷胱甘肽S-转移酶基因多态性与特发性男性不育患者氧化应激水平的关系[J].贵州医科大学学报，2019，44（11）：1268-1272.

[17] 杨书才，唐景云，周杰，等.6493例泌尿生殖道感染患者解脲支原体和人型支原体感染情况及药敏试验分析[J].检验医学与临床，2019，16（13）：1888-1891.

（收稿日期：2020-07-14）