小麦TaHPPR基因的克隆与表达分析
2021-03-24郝小聪王伟伟张风廷房兆峰曹志琛朱文根赵昌平汪德州唐益苗
郝小聪,王伟伟,张风廷,孙 瑞,房兆峰,柳 珊,曹志琛,朱文根,赵昌平,汪德州,唐益苗
(北京市农林科学院杂交小麦工程技术研究中心,北京100097)
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羟基苯丙酮酸还原酶(Hydroxyphenylpyruvate Reductase-HPPR)属于D-异构体特异性2-羟基酸脱氢酶家族[1]。该家族中的酶以NADH或NADPH作为辅酶催化2-酮酸可逆地还原成D-2-羟基酸,糖酵解和柠檬酸循环是产生NADH的主要来源,NADH分子是线粒体中能量生产的控制指标[2]。研究发现HPPR对4-羟苯基丙酮酸(pHPP)具有最高的亲和力,其中pHPP是植物光合作用的重要组成[3-4],HPPR催化pHPP还原为4-羟苯基乳酸(pHPL),是酪氨酸生物合成迷迭香酸Rosmarinic acid(RA)的关键酶[5-6]。
HPPR基因广泛存在于植物中,拟南芥HPPR家族包含 4个HPPR基因 ,HPR1,HPPR2(AT1G79870),HPPR3(AT1G12550)和HPPR4(AT2G45630),其 中HPPR2和HPPR3编码功能性羟基苯丙酮酸还原酶[7]。拟南芥中的HPR1是一种过氧化物酶体酶,参与了光呼吸循环,HPPR2、HPPR3和HPPR4负责将酪氨酸转化为酚类化合物,并在胞质溶胶中为光呼吸循环提供支路,其中HPPR4催化活性较低可能参与其他生物学过程[8-9]。为进一步分析HPPR基因的时空表达模式,构建拟南芥过表达相应启动子-GUS载体的转基因植株,在幼苗中,HPPR2在植株中非特异性表达,HPPR3主要在根中表达,HPPR4主要在毛状根和叶脉中毛状体表达;在花序中,HPPR2再次广泛表达,HPPR3和HPPR4在幼花的雄蕊中观察到表达。其中HPPR4是花药壁特异性基因,在花药中特异性表达的,在特定阶段阻断了花药的发育途径,从而导致花药发育异常[10]。丹参羟基苯丙酮酸还原酶(HPPR)基因SmHPPR在RA的生物合成中起重要作用。SmHPPR在茎和根中高度表达但在叶中弱表达,SmHPPR定位于细胞质中,SmHPPR含有特定的催化结构域与NAD(P)H结合,可能是光呼吸活性的细胞溶质NADPH依赖性羟基丙酮酸还原酶[11]。……
