福建柏实时荧光定量PCR内参基因的选择
2021-03-19,*
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(1. 福建农林大学园林学院,福建 福州 350002;2. 福建农林大学林学院,福建 福州 350002)
实时荧光定量PCR(RT-qPCR)指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法,具有准确性高、特异性好、试验过程简便等特点[1-2]。荧光定量试验结果的准确性和可靠性取决于特定引物的扩增效率、cDNA的纯度以及内参基因的稳定性等,稳定的内参基因能够使目的基因的定量分析结果准确、特异性好[3-4]。在不同植物间或同一植物不同组织部位间内参基因的表达稳定性有一定差异,通常会选择在植物生命活动全过程或外界环境变化时都能表达相对稳定、受环境影响较小的管家基因(Housekeeper gene),如肌动蛋白(Actin)、泛素蛋白(Ubiquitin)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)等[5-6]。
福建柏(Fokienia hodginsii(Dunn)Henry et Thomas)为柏科福建柏属,为我国特有种属,分布在福建、广东、云南、广西等我国南部省份[7];其树干通直、树型优美、四季常青、适应性强、抗性较好、材性稳定、结构细腻,是我国优良的材用-景观两用型树种之一。不仅如此,福建柏精油中含有多种药用、化工价值的成分,开发利用价值高[8]。但福建柏的研究集中于混交造林、成分分析等方面,随着研究的深入,分子生物学研究必不可少,如功能基因、转录因子的表达分析等研究,均涉及到使用荧光定量PCR 技术检测目的基因的相对表达情况。本研究从福建柏转录组中选择了8 个管家基因作为候选内参基因,包括肌动蛋白-7(Actin-7,ACT7)、泛素蛋白(Ubiquitin,UBQ)、延长因子……
