杨 帆，胡章薇，姚 强

（青海大学农林科学院/青海省农业有害生物综合治理重点实验室/农业农村部西宁作物有害生物科学观测实验站，青海西宁810016）

青稞（Hordeum vulgare）为禾本科大麦属，是大麦的一种特殊类型，又名裸大麦，因其具有较强的耐寒性，多分布在青藏高原高海拔的农业区。种传病害是影响青稞安全生产的重要因素之一，其中由大麦坚黑粉菌（Ustilago hordei）引起的坚黑穗病为害较为严重。大麦坚黑粉菌的休眠菌丝体和冬孢子附着在种子表面，次年播种后分别以休眠菌丝体蔓延到芽鞘上，或冬孢子萌发形成侵染丝自幼苗胚芽鞘侵入为害[1]。受侵染植株田间显症前与健康植株无异，显症后再进行防治意义不大。凌立等于1940 年调查发现，大麦坚黑穗病的田间发病率一般在10%左右，最高可达60%[1]。利用内吸性种子处理杀菌剂进行播前种子处理可有效控制该病害[2]。虽然21 世纪坚黑穗病的发生率、危害程度均远不及20 世纪，但现生产上每年仍有发生，若不采取有效措施，病原菌随种子传播侵染，病害发生则会逐年加重[3]。在生产上，仅为了防控该病害就进行种子杀菌处理，具有一定的盲目性，同时造成一定的化学药剂残留和环境污染。因此，建立快速检测技术至关重要。

本研究应用的环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是Notomi 等于2000年报道的一种能够特异、高效、快速地扩增靶基因的新型核酸扩增技术[4]。该技术在1 h 左右即可完成扩增，其灵敏度是普通PCR 的100 倍[4]。结果可通过电泳仪[5]、real-time PCR 仪[5]及浊度仪[6]进行检测，还可通过SYBR Green Ⅰ[7]、钙黄绿素[8]、羟基奈酚蓝[9]染色后用肉眼识别。……