刘宇阳 蓝锴 熊蕊 鲁洋 蔡依玫 向国秀 陈茶 黄彬★

大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）是条件致病菌，常导致免疫低下人群感染［1］。2019年耐碳青霉烯类大肠埃希菌（carbapenem-resistantEscherichia coli，CREC）的全国平均分离率为1.7%，比2018年上升了0.2%。随着多粘菌素耐药基因mcr-1的检出［2］，替加环素（tigecycline，TGC）被认为是治疗CREC 的最后一道防线［3］。不幸的是，已有大量报道显示细菌对TGC 耐药，其主要耐药机制是RND（resistance nodulation division，RND）外排泵系统的上调［4］。研究表明，大肠埃希菌中AcrAB受全局调控因子MarAB 的调控［5］，其外膜通透性受主要膜孔蛋白OmpC、OmpF 和OmpX 的调节［6］。异质性耐药（heteroresistance，HR）意指同一克隆菌株中同时存在对某种抗生素耐药和敏感亚群的现象［7］。HR 的难检出性常导致临床治疗失败和感染复发。目前，耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌对TGC 异质性耐药已有报道［8］，但尚未见CREC-TGC-HR 的报道。本研究对检测异质性耐药的方法进行比较，分析并探讨CREC-TGC-HR的流行情况和耐药机制，为临床治疗和合理应用抗生素提供依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

收集2017年1月至2019年3月间广州（中山大学附属第一医院17 株、广东省中医院23 株）和宁夏（宁夏医科大学宁夏总医院18 株）两个地区三个中心临床分离的CREC，所有菌株均经Vitek 2 全自动微生物鉴定系统鉴定。质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922，由广东省中医院大学城医院检验科微生物室保存。

1.2 主要仪器与试剂

TGC 粉末购自英国APE-BIO 公司，Mueller-Hinton（M-H）琼脂或M-H 肉汤购自英国Oxoid 公司，Vitek 2 全自动微生物检测系统购自法国生物梅里埃公司，RNA 提取试剂RNAiso Plus、qPCR 试剂盒SYBR Green qPCR Master Mi 和逆转录试剂盒PrimeScript RT 均购自中国大连TaKaRa 公司。ViiA 7 Dx 荧光定量PCR 仪购自美国Applied Biosystems 公司，GBox 全自动凝胶成像仪购自美国Bio-Rad 公司。……