杨艳会，杨 恒，张重义，伊艳杰，李瑞芳，董 臣，张宗武，王超杰

地黄转运蛋白基因的克隆、亚细胞定位与表达分析

杨艳会1，杨 恒1，张重义2，伊艳杰1，李瑞芳1，董 臣1，张宗武1，王超杰1

1. 河南工业大学生物工程学院，河南 郑州 450001 2. 福建农林大学作物科学学院，福建 福州 350002

克隆地黄多药及有毒化合物外排（multidrug and toxic compound extrusion，MATE）转运蛋白基因，并进行亚细胞定位与时空表达分析，为深入研究其在地黄转运次生代谢产物中的分子功能奠定基础。利用地黄转录组数据库候选基因序列，利用实时荧光PCR（RT-PCR）克隆基因；利用生物信息学软件对其编码蛋白的结构、理化性质、同源性和进化树进行分析；通过与绿色荧光蛋白（GFP）融合表达进行亚细胞定位；利用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）的方法测定该基因的时空表达模式。克隆获得1892 bp的基因序列，基因编码524个氨基酸、具有2个典型的MatE结构域和12个跨膜结构；RgMATE6蛋白与越橘的VcMATE6蛋白亲缘关系最近；RgMATE6-GFP载体瞬时表达的结果发现RgMATE6蛋白定位在液泡膜上；qRT-PCR分析发现基因在地黄不同时期的根中表达最高，尤其是块根膨大前期。RgMATE6蛋白定位在液泡膜上，在地黄块根膨大期的根中表达较高，初步表明RgMATE6可能参与地黄体内次生代谢产物向液泡转运的过程。

地黄；MATE转运蛋白；生物信息学；亚细胞定位；表达分析

地黄Libosch为玄参科地黄属多年生草本植物，是我国传统的四大怀药之一。地黄体内的许多次生代谢产物均具有生物活性，常见的有毛蕊花糖苷、梓醇及多糖类，具有抗炎、抗肿瘤、缓泻等作用，在临床上广泛应用[1]。……