徐 莹， 吕东阳， 任 雪， 阎 英， 李 玲

北部战区总医院1.放射治疗科；2.妇产科，辽宁 沈阳 110016

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一[1]，放疗是肺癌的主要治疗手段[2]。然而，仍有部分患者放疗疗效不理想，出现肿瘤放射线抵抗。因此，对肺癌放射抵抗机制的研究成为了放疗领域的研究热点。人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)存在于90%的恶性肿瘤中，端粒是真核细胞染色体末端发现的一种特殊的DNA-蛋白质复合体，端粒稳态与放射敏感性密切相关，增加放射敏感性有助于控制肿瘤的生长速度[3]。高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)是在哺乳动物中广泛存在的一种丰富的染色质相关蛋白，参与肿瘤的发生、增殖、侵袭和转移，其高水平表达与临床预后不良相关[4]。有研究表明，HMGB1对hTERT活性没有影响，改变HMGB1的表达不会导致染色质结构的任何明显变化[5]。另有研究表明，HMGB1基因在小鼠胚胎成纤维细胞中的沉默导致hTERT活性下降及端粒功能障碍，而HMGB1过表达则增强了hTERT活性[6]。目前，HMGB1基因沉默是否下调hTERT表达，以及是否提高肿瘤的放疗敏感性尚未清楚。本研究旨在探讨HMGB1沉默对hTERT的抑制作用，以及其与肺癌放疗敏感性的关系。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 将肺癌细胞系(H-1299)和正常肺泡上皮细胞(BEAS-2B)在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养。根据处理方式不同将细胞分为对照组(无X射线照射，转染空白质粒)，HMGB1 KO组(转染HMGB1-shRNA，敲除HMGB1)，KO+5 Gy组(转染HMGB1-shRNA，敲除HMGB1，照射剂量5 Gy)，KO+10 Gy组(转染HMGB1-shRNA，敲除HMGB1，照射剂量10 Gy)。

1.2 构建稳定转染的细胞系 选择针对HMGB1的人shRNA 5‘-GCTCAAGGAGAAT TTGTAA-3’，该序列与3’端结合作用最强，然后以与人类基因同源性有限且打乱的人shRNA序列5‘-GCTGGAGCAGTCCGATC-3’作为阴性对照。……