杨晓亮，杨晓波，师宏斌，张 强

环磷酰胺(CTX)在临床肿瘤治疗中的应用越来越广泛，如恶性淋巴瘤、肺癌、睾丸癌、卵巢癌以及其他自身免疫系统疾病等[1]。随着CTX在临床中的广泛应用，其对机体的副作用的相关报道也越来越多[2]。其中，CTX导致膀胱肿瘤的报道逐渐受到临床及基础研究者的关注[3]。然而，对于CTX可致膀胱肿瘤的发生机制目前鲜见报道,DNA的损伤是肿瘤发生的重要原因之一。因此，DNA损伤的修复机制为避免肿瘤的发生起到了关键作用[4-5]。研究发现，DNA损伤后核心组蛋白的化学修饰对于DNA的修复起到了重要作用。组蛋白(Histone)是真核细胞特有的蛋白质，其包括H1、H2A、H2B、H3和H4五种。有研究报道，H2A组蛋白家族中包括H2A1、H2A2、H2AZ和H2AX，其中H2AX的含量在H2A中最少。然而，其在DNA损伤以及染色质的代谢中发挥了重要的作用[6-7]。因此，本实验拟通过对H2AX的检测，探讨其在CTX所致膀胱肿瘤的作用机制。

1资料与方法

1.1 一般资料：6周龄12只昆明SD大鼠，雄雌各半，随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6)。实验动物由宁夏医科大学动物实验中心(SPF级)提供。

1.2 主要试剂和仪器：环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司，H2AX抗体、二抗等购自博士德生物有限公司，免疫组化试剂盒等购自北京中杉金桥生物技术有限公司，蛋白提取试剂盒购自凯基生物有限公司。

1.3 模型建立及标本制备：实验组大鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg[8]，对照组给予相同剂量生理盐水腹腔注射。正常饲养24 h后，给予乌拉坦麻醉致死量，在无菌低温环境下剖腹取膀胱，在膀胱正中剖开，左侧膀胱置于-80 ℃保存，右侧膀胱用4%的多聚甲醛固定。……