高少阳，王明伟，张 盛，岳君秋，常 青

术中快速病理诊断是辅助临床医师在术中明确肿瘤良恶性、决定手术方式的重要手段，病理切片经HE染色在镜下观察细胞形态、组织学特征，并进行快速诊断。由于HE染色切片因其自身局限性、制片过程中造成假象等可能导致误诊，难以确诊疑难病例，有较大的医疗风险。术中对冷冻切片进行快速免疫组化染色，可提高术中快速病理诊断的准确性。目前，文献报道的术中快速病理诊断在技术步骤、效果、时长、成本等各有优缺点[1-3]。本科室在实践工作中建立快速手工免疫组化检测体系，用于术中辅助诊断疑难病例，取得良好效果，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集16例冷冻切片(经HE染色难以确诊的疑难病例)，其中10例乳腺导管原位癌伴/不伴微小浸润，3例乳腺硬化性腺病，3例低分化癌。另收集2例乳腺纤维腺瘤作为对照，留取组织标本或切片进行术中快速免疫组化染色。

1.2 试剂(1)实验室自配AAF固定液(95%乙醇85 mL、甲醛10 mL、乙酸5 mL)，PBS缓冲液(pH 7.3，北京中杉金桥公司)。(2)快速免疫组化一抗和石蜡切片免疫组化一抗试剂详见表1、2。二抗显色系统采用EnVision FLEX酶标二抗及DAB工作液；p63、CKpan采用Leica BOND-MAX全自动免疫组化仪进行染色，二抗及显色系统为Leica Bond显色试剂套装；Calponin采用DAKO自动染色机Link48和EnVision FLEX检测系统进行染色。

1.3 主要仪器全自动免疫组化仪BOND-MAX/Leica，Autostainer Link48/DAKO等。

1.4 方法

1.4.1术中快速手工免疫组化 (1)新鲜组织于-20 ℃速冻后4～6 μm厚切片，固定液(AAF或冷丙酮)固定1 min，经PBS冲洗5 s，丙酮固定组织室温晾干5～10 s；(2)滴加一抗于37 ℃孵育5 min，PBS冲洗5 s×3次；……