陈 玲，梁永波，李 莉，刘玲玲，齐 华

在临床病理诊断和形态学研究中，免疫组化是病理科主要的辅助诊断技术之一，对疾病诊断、预后判断、靶向治疗相关指标的检测指导临床用药、了解发病机制和检测病原体等方面起重要的作用[1-2]。免疫组化整体染色步骤繁琐，每一步骤所用试剂及操作方法均可能影响染色效果，本文主要探索向酶标羊抗兔聚合物中添加不同表面活性剂对免疫组化染色强度的影响，以期筛选出对免疫组化染色效果具有正向作用的辅助试剂。

1 材料与方法

1.1 实验材料组织蜡块来自于赛诺特医学检验所，3 μm厚切片。

1.2 试剂Tris-EDTA抗原修复液(pH 9.0)，抗体p40(克隆号ZR8)，CK5(克隆号C9E33)，内源性过氧化物酶阻断剂，分别含0.2%Saponin、0.2%Tritoon-100和0.2%Nonidet P-40的酶标羊抗兔(Microstacker)聚合物，以上试剂来自河南赛诺特公司EnVision检测系统及DAB免疫显色剂(Dako公司)；以上所有试剂均为即用型。辅助试剂：75%、85%、95%和100%乙醇；透明试剂二甲苯；封片胶等。

1.3 实验步骤(1)常规免疫组化脱蜡至水。(2)使用高压锅抗原修复法修复；待锅中液体自然冷却至室温后取出切片，蒸馏水浸泡5 min×2次，使用免疫组化油笔对待测组织进行画圈，将待测组织全部包含在圈内。(3)加过氧化物酶封闭剂，室温孵育5 min，置于PBS清洗液5 min×2次。(4)一抗孵育：室温60 min，置于PBS清洗液5 min×2次。(5)二抗孵育：室温30 min(含 Nonidet P-40、Saponin、Trition-100的酶标羊抗兔聚合物和Dako公司EnVision检测系统HRP，置于PBS清洗液5 min×2次。(6)显色，滴加100 μL DAB显色液，孵育5 min，纯化水冲洗；(注意：显色液需要现配现用)。(7)复染：苏木精复染液孵育5 min，再用纯化水冲洗并浸泡5 min。(8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。……