邓云贵 ， 刘东海 ， 田宗旺 ， 魏国昊 ， 李 想 ， 王 琦 ， 王 瑾 ， 刘彦威，2 ， 刘 娜,2

(1. 河北工程大学生命科学与食品工程学院 ， 河北 邯郸 056038；2. 河北工程大学动物医学重点实验室 ， 河北 邯郸 056038)

小肠肠球菌为人兽共患的条件致病菌。在国外，1985年首次从生长受阻的雏鸡分离到。各日龄鸡均可发病，主要危害2～3周龄的雏鸡。临床表现为心内膜炎、败血症、脑软化、骨髓炎等[1]。一般分离率蛋鸡为8.8%，肉鸡为5.5%[2-3]，有的分离高达42%，死亡率为36%[4-5]，给养鸡业造成较大损失。在国内，有鹅、狐狸、猪等动物感染小肠肠球菌的报道[6-8]，还未见鸡只感染的报道。由于小肠肠球菌常引起胚胎感染而导致死胚和病、弱雏鸡，其病因往往归咎于鸡胚质量差、孵育条件不佳等因素[5]。因此，其致病机制和流行情况易被忽视。鉴于此，本试验从1日龄(刚出壳)病弱雏鸡肝脏中分离鉴定了小肠肠球菌，并建立快速检测方法，以期为鸡源小肠肠球菌病诊断和防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与设备 脑心浸出液(BHI)肉汤、营养琼脂培养基、D培养基-结晶紫-七叶苷琼脂、细菌基因组DNA提取试剂盒、胶回收试剂盒、TaqPCR预混液，均购自北京索莱宝科技有限公司；SYBR Green I Premix Ex，购自天根生化科技有限公司。荧光定量PCR仪，购自德国耶拿分析仪器股份公司。

1.2 菌株与病料来源 对照菌株[粪肠球菌(Enterococcusfaecalis,Efa)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium,Efm)、鹑鸡肠球菌(Enterococcusgallinarum,EG)、禽肠球菌(Enterococcusavium,Eav)、盲肠肠球菌(Enterococcuscecorum,EC)、大肠杆菌(Escherichiacoli,E-co)、链球菌(Streptococcus,S)、沙门菌(Salmonella,SE)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)]，均由河北工程大学动物医学重点实验室保存。病料采自病雏鸡内脏。

1.3 方法

1.3.1 病理学观察 对病雏进行剖检，观察内脏器官病变。……