陈丰伟 ， 曹 杰 ， 马 翀 ， 张 巽

(1.海南农垦草畜产业集团有限公司 ， 海南 澄迈 571900 ； 2.中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193 ；3.中牧实业股份有限公司 ， 北京 丰台 100071)

奶牛副结核(Paratuberculosis),又称约内氏病(Johne′s disease,JD)，是一种慢性肉芽肿胃肠道疾病，其致病菌为副结核分支杆菌(Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis，MAP)。JD牛可通过粪便以及牛奶传播MAP，易感牛只经口摄入后即可感染。Nielsen等关于JD牛不同感染阶段排放MAP情况的论述有[1]：一是JD牛在感染初期并不排菌，随着时间的延长会逐渐排菌；二是亚临床期虽不表现症状，但会向环境中间歇排菌；三是临床期表现腹泻症状后，会持续大量排菌。目前对于此病暂无有效的治疗，且无疫苗，因此JD牛持续大量排菌应当立即淘汰。

JD的防控应首先做好感染牛的标记与隔离，然而JD的检疫受到多种因素影响：一是感染早期牛主要以细胞免疫为主，降低了血清ELISA试验的敏感性[2]；二是亚临床期可能会通过粪便间歇性排放少量MAP，从粪便中分离和培养病原菌存在一定困难。世界动物卫生组织(OIE)于2014年颁布的相关文件提及JD检疫金标准仍然是粪便分离培养，这一检测方法工作量大，成本高，耗时长(需要花费大约16周的时间)[3]。如今，PCR基因检测技术正逐渐成为JD检疫的重要手段，该方法可快速得出结果，并具备与粪便分离培养相接近的特异性和敏感性[4]。

本试验选取北京地区某规模化奶牛场，收集MAP血清抗体阳性牛的粪样，提取DNA后，使用MAP Real-time PCR试剂盒进行检测，以期探明MAP血清抗体阳性牛的粪便排菌情况。

1 材料与方法

1.1 试验对象 试验牛场MAP血清抗体阳性率为11.13%。……