朱雨凝 ， 姜忠玲 ， 丛 霞 ， 曹荣峰 ， 李华涛 ， 田文儒 ， 丰艳妮

(青岛农业大学动物医学院 ， 山东 青岛 266109)

奶牛钙、磷代谢紊乱性疾病是奶牛养殖业中重要常发病，围产期奶牛分娩后转为泌乳过程的生理应激，以及体内钙的分配供给失衡，无法维持正常的血钙浓度，易发生低钙血症[1]；正常泌乳奶牛受疾病、饲养或环境等因素影响机体钙代谢平衡，也会引起奶牛钙代谢紊乱。钙的代谢与肾脏功能密切相关，肾小球滤出的钙90%以上被肾小管重吸收，肾脏相关疾病会引起钙代谢紊乱，同样钙代谢紊乱也会引起肾脏疾病[2-3]。

RNA-seq作为一种高通量测序技术，能在单核苷酸水平上对特定器官、组织或细胞所处状态的转录活动进行深度检测[4]。现有的诊断方法难以对奶牛钙磷代谢紊乱性疾病进行早期诊断或预警。因此，本试验以牛肾小管上皮细胞为研究材料，利用RNA-seq技术分析低钙环境造成差异表达基因，以期找出低钙状态下早期诊断或预警围产期奶牛低钙血症的方法或生物标志物，为有效预警围产期奶牛低钙血症并提早防控其发生、发展提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 高糖DMEM/F12，购自美国Gibco公司；胎牛血清(FBS)，购自HyClone公司；EDTA、EGTA、100×青链霉素混合液、核酸染料、琼脂糖粉剂和1×TAE电泳液，均购自北京索莱宝科技有限公司；二甲基亚枫(DMSO)、胰蛋白酶，均购自美国默克密理博公司；CCK-8试剂和Ca2+浓度测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；RNA提取试剂盒，购自北京艾德莱生物科技有限公司；TRIzol溶液、cDNA反转录试剂盒、荧光染料(TB Green PremixExTaqⅡ)和DL2 000 Marker，均购自宝日医生物技术(北京)有限公司；……