（海南省药物研究所，海南 海口 570311）

前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9）基因是 2003年被发现的一个脂质代谢调节蛋白[1]，它是哺乳动物前蛋白转化酶家族的第九个成员，其结构组成包括信号肽、前结构域、催化结构域和 C-末端结构域[2]。PCSK9基因在肝脏、小肠及肾脏等组织中均有表达，它在胆固醇和脂质代谢过程中具有非常重要的作用[3]。研究表明，PCSK9基因参与脂质代谢主要是通过促进肝细胞的低密度脂蛋白受体 (low density lipoproteinreceptor，LDLR)的降解[4]，使血液中低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的水平上升[5]，从而引起高胆固醇血症的发生[6-9]。因此，PCSK9是人类高胆固醇血症的主要致病基因之一[10]。

PCSK9基因已经成为治疗高胆固醇血症的潜在靶点。PCSK9抑制剂可通过抑制或降低PCSK9基因，阻断PCSK9介导的LDLR降解，上调细胞表面 LDLR，从而下调LDL-C的水平，有效治疗高胆固醇血症，减少心血管疾病的发生。因此，通过繁育获得足够数量的PCSK9基因工程小鼠疾病模型，对于开展高胆固醇血症等心血管疾病的研究与治疗具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 实验动物

野生型C57BL/6小鼠和PCSK9基因工程小鼠均饲养于海南省药物研究所实验动物中心SPF级动物房中。

1.2 主要试剂与仪器

酚，氯仿，无水乙醇，Triton X-100，蛋白酶K，Trizma Hydrochloride Solution，2×Taq Master Mix（Dye Plus），琼脂糖，DNA Marker，0.5×TBE 缓冲液，基因组DNA提取试剂盒。

电子分析天平，电热恒温水箱，PCR仪，低温高速离心机，电泳仪，凝胶成像系统。

1.3 试验方法

1.3.1 PCSK9基因工程小鼠的饲养与繁殖。小鼠饲养于海南省药物研究所实验动物中心SPF级屏障环境中，饲养温度为 22～26 °C，相对湿度为 50%～70%，人为控制昼夜明暗交替，自由饮水和采食。……