利用CRISPR/Cas9系统构建SBNO2基因敲除细胞系及其功能研究
2021-03-15王妍鳕任亭亭孙跃峰刘磊
王妍鳕,任亭亭,孙跃峰,刘磊
(1.甘肃农业大学动物医学院,甘肃 兰州 730070;2.中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃 兰州 730046)
草莓缺口同源物2(Strawberry Notch Homolog 2,SBNO2)在Notch信号通路及NF-κB通路过程中发挥重要功能[1-2].Notch基因编码一类高度保守的细胞表面受体,调节多种生物的细胞发育过程.Notch信号影响多能干细胞的分化、细胞凋亡、细胞增殖及细胞边界的形成等过程.研究表明,IL-10以STAT3依赖的方式刺激SBNO2基因在骨髓巨噬细胞中的表达,SBNO2是IL-10下游抗炎作用通路上的重要组成部分,能够抑制炎症基因表达[3].在急性炎症反应过程中,IL-6也能够刺激乳鼠星形胶质细胞中SBNO2的表达[1].Karim等[3]发现SBNO2能够显著抑制NF-κB介导的转录并认为SBNO2可能与一系列其他蛋白相互作用,选择性地抑制巨噬细胞中的转录.然而对于SBNO2基因在病毒感染过程中的作用机制研究很少,至今尚不清楚.
CRISPR/Cas9(clustered regularly interapaced short palin-dromic repeats/CRISPR-associated proteins 9)是一种由RNA核酸酶对目的基因进行特定DNA修饰的技术[4].RNA导向的CRISPR-Cas9系统已被应用于多种细胞系和生物体的DNA和RNA编辑[5-6].能够快速且高效地进行表观遗传编辑,通过基因组位点敲除、修饰和突变,致使基因组表达受到调控,从而影响其功能[7].
口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组编码4种结构蛋白(VP1、VP2、 VP3和VP4),其中VP1作为高度可变的结构蛋白,G-H环内有最具抗原性的位点[8-9].VP1编码区的核苷酸序列因其在病毒附着、侵入、保护性免疫和血清型特异性等方面发挥重要作用,已被用于口蹄疫病毒毒株的遗传特性鉴定以及分子流行病学研究[10-11].病毒基……
