盐胁迫下蚕豆不同组织实时荧光定量PCR内参基因的筛选
2021-03-11樊有存张红岩杨旭升武学霞刘玉皎
樊有存,张红岩,韩 芊,杨旭升,武学霞,刘玉皎
(1.青海大学,青海 西宁 810016; 2.青海大学农林科学院,青海 西宁 810016;3.省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室,青海大学,青海 西宁 810016;4.青海大学生态环境工程学院,青海 西宁 810016)
实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,RT-qPCR)是当前研究基因表达水平的主要技术手段[1]。为了准确检测目的基因的表达情况,一般会选用一个或多个表达相对稳定的内参基因进行校正[2-3]。目前,植物种常用的内参基因有α/β微管蛋白基因(TUA,TUB)、参与胞质核糖体小亚基及翻译因子(18SrRNA)、肌动蛋白基因(ACT)、蛋白合成中的翻译延伸因子(GAPA)、转录延伸因子基因(EF1a)及蛋白质加工代谢相关的亲环蛋白(CYP)等[4-7]。但实际上,在不同的细胞、组织、生理阶段,目的基因的表达量可能存在差异[8],亦会因所选用的内参基因的不同而影响实验结果。近年来,关于豆科植物内参基因的报道有很多。王骁等[9]筛选出CYP2和GAPDH为大豆籽粒发育过程中表达最为稳定的基因,UKN2和TUB4为胚轴中表达稳定的基因,而ACT2和CYP2为子叶中表达稳定的基因,逆境胁迫下UKN2、TUB4、EF1A较稳定。付媛媛等[10]发现,紫花苜蓿在各种胁迫(激素、盐胁迫、干旱和暗条件)下不同组织中表达量相对比较稳定的内参基因为MSC27、18SrRNA、EF-La和Actin2。
土壤盐渍化已成为影响植物生长发育和作物产量的主要因素之一,中国约20%耕地面积受到土壤盐渍化的影响[11]。蚕豆(ViciafabaL.)作为中国重要的食用豆类作物之一,具有粮、饲、菜、肥、药兼用和深加工增值等特点,且蚕豆能适应冷凉气候,并有较强的抗盐碱能力,同时还有“生物固氮之王”的誉称,是种植业结构调整中重要的养地作物和间套作物[12-14]。……
