左冉坤，迟 良，董记红，李心慰，王 哲，刘国文，刘焕奇*

(1.青岛农业大学 动物医学院，山东 青岛 266109；2.吉林大学 动物医学学院,吉林 长春 130062)

围产期(通常是指产前3周和产后3周)是奶牛泌乳周期中非常关键的一个时期。产后奶牛由于干物质摄入减少，泌乳启动，导致能量需求增加，使奶牛机体处于能量负平衡状态，进而动员脂肪，脂肪分解增加，导致高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid，NEFA)血症。当肝细胞吸收大量NEFA，超过了自身代谢能力时，可造成NEFA不完全被氧化，产生大量酮体，如β-羟丁酸(β-hydroxybutyrate，BHBA)、乙酰乙酸和丙酮，造成酮病的发生[1]。研究表明，酮病奶牛肝脏炎性水平显著增加，肝脏NF-κB炎性通路显著激活，炎性细胞因子TNF-α和IL-1β等浓度显著升高[2-3]，与酮病奶牛的高BHBA血症密切相关。

线粒体融合蛋白2(mitofusin 2，MFN2)，是定位于线粒体外膜的高度保守的GTP酶，能参与线粒体外膜的融合，对线粒体功能的发挥起着重要的作用[4-6]。而线粒体是脂肪酸氧化的主要场所[7-8]，并且线粒体的功能与NF-κB通路的活化有关[9]，然而，MFN2对奶牛肝细胞NF-κB通路的影响尚未见报道。因此，本研究采用Western blot和qRT-PCR技术检测NF-κB炎性通路关键分子的蛋白和基因表达，探讨高表达MFN2对高BHBA活化的NF-κB通路的影响，为奶牛酮病临床病理学研究提供理论依据。

1 材料方法

1.1 主要试剂双抗(青链霉素)、Tris和地塞米松均购自Sigma公司；胎牛血清和RPMI-1640购自Gibco公司；Trizol和Premix Ex-Taq购自TaKaRa公司。

1.2 奶牛肝细胞的分离与培养采用两步灌流法分离原代肝细胞[10]。手术切除荷斯坦犊牛肝尾状叶，用灌流液A (140 mmol/L NaCl,10 mmol/L HEPES,6.7 mmol/L KCl,0.5 mmol/L EDTA,2.5 mmol/L 葡萄糖;pH7.2～7.4,37℃)灌注肝脏12 min，流速为50 mL/min。然后用……