辛旭，吴香菊，齐静，王永志，李相安，杜正国，单虎，杜以军*

(1. 青岛农业大学动物医学院，山东 青岛 266000；2. 山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东 济南 250100；3. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东 济南 250100；4. 济南护理职业学院，山东 济南 250100；5. 青岛农业大学海都学院，山东 莱阳 265200；6. 沂水县畜牧局姚店子畜牧兽医工作站，山东 沂水 276400)

口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是一类在偶蹄目动物之间传播的严重疾病，传播速度快，危害严重，被世界各国广泛重视[1]。口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)共有O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3等7个血清型，不同型病毒的血清之间无交叉保护[2]。目前全球各国对该病的防控方法主要是注射疫苗, 在暴发口蹄疫时，欧盟规定，可进行疫苗的紧急接种[3]。

口蹄疫病毒主要有8个非结构蛋白(L、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D)，其中一些非结构蛋白具有免疫原性，3B蛋白便是其中之一[4]。3B蛋白也称Vpg蛋白，共有3种不同的3B蛋白(3B1、3B2、3B3)，分别由口蹄疫病毒基因组中的P3编码区里3个相连的基因编码，此现象在RNA病毒中比较少见[5]。目前对于3B蛋白的功能研究已经取得了较大的进展，由于3B蛋白有pUpU结构，故可与新合成的子代RNA相连，在病毒RNA复制合成时可以起引物的作用[6-7]。

本研究通过原核表达系统表达口蹄疫病毒的3B蛋白并进行纯化，再多次免疫试验动物，制备针对3B蛋白的多克隆抗体并进行鉴定，为3B蛋白的相关研究提供了重要的材料。

1 材料与方法

1.1 试验动物

体重约2 kg的新西兰大白兔购自山东大学实验动物中心。

1.2 主要试剂

载体pET28a、pXJ-3B质粒、HEK-293T细胞及HeLa细胞由本实验室保存。大肠杆菌DH5α感受态细胞、大肠杆菌BL21感受态细胞购自上海唯地生物技术有限公司；……