王冬佳， 张 雄

（浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院口腔科，浙江 杭州 310006）

口腔颌面部创伤、炎症、肿瘤及先天畸形所致的颌骨缺损会给患者的生理和心理带来极大的伤害[1-2]。因此，颌骨缺损的治疗一直受到口腔医生的重视。近年来，组织工程作为一门新兴的交叉学科，发展迅速。将种子细胞和支架材料相复合的骨组织工程为颌骨缺损的功能修复与重建提出了新思路，其已成为当前的研究热点之一[3-4]。

种子细胞和支架材料构成了组织工程的核心部分[5-6]。其中，骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其易于分离培养、增殖能力强及免疫原性低，被认为是最理想的种子细胞[7-8]。但是，正常动物细胞在体外培养条件下并不是无限增殖的。体外培养中的大多数细胞仅在有限的时间内维持生长,然后自行停止生长[9]。这种培养过程中所呈现的细胞增殖极限现象最初由Hayflick[10]在1961年观察到，称为“Hayflick极限”。

已有的研究表明，间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）在体外扩增过程中会逐渐老化[11-12]。然而在实验研究中，研究者往往会使用不同代数的BMSCs进行各项实验。但是不同的细胞代数是否会对BMSCs的基本生物学特性产生影响，细胞体外增殖和成骨分化能力是否一致，细胞代数在几代以内可以用于实验研究而不影响实验结果，这些未曾报道过。在本研究中，通过比较P1、P3、P5、P7、P9 代 BMSCs的细胞形态、体外增殖和成骨分化能力，分析不同代数BMSCs在实验研究中是否对实验结果有影响。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1实验动物 4周龄雄性SD大鼠由浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院实验动物中心提供。……