苏文娟， 孔 伟， 张宝良

(甘肃省家畜繁育改良管理站，甘肃 武威 733000)

牛病毒性腹泻(BVD)，亦被称为牛粘膜病，被归类为一种接触型传染病，且传播力强、传播途径广泛。本病主要是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，临床主要的特征可以表现为体温升高明显、萎靡不振、食欲减退甚至拒食、逐渐停止反刍行为、粘膜充血肿胀、产奶量受到严重影响等典型症状。本研究通过对甘肃武威地区某牛场中13份样本进行血清学和基因层面的检测，了解该养殖场BVD发病的情况。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 病料来源 甘肃武威地区某牛场中腹泻病牛13只，采集静脉血2 mL，每只牛粪便20 g。

1.1.2 样品采集 选择有明显腹泻的病牛，采集静脉血2 mL，每只牛粪便20 g。

1.1.3 试验材料 爱德士生产的牛病毒性腹泻抗原试剂盒，天根RNA提取试剂盒，Takara生产的反转录试剂盒和扩增试剂盒。

1.2 方 法

1.2.1 血清学检测 取病牛血液进行3 000 r/min离心5 min，取血清进行检测，实验步骤参考爱德士牛病毒性腹泻抗原检测试剂盒说明说进行检测，结果进行数据分析判断阴阳性。

1.2.2 PCR鉴定 取粪便5 g进行反复冻融，过滤后进行提取，RNA提取方法参考天根RNA提取试剂盒使用说明书进行操作，反转录以及PCR参考Takara试剂盒使用说明书进行操作，引物采用BVDV 5′UTR引物进行扩增(F：5′-CCTAGCCAT-GCCCTTAGTAGGACT-3′；R：5′-GGAACTCCA-TGTGCCATGTACA-3′)[1]，引物在上海生工进行合成。

2 结果

2.1 血清学检测结果

使用爱德士牛病毒性腹泻抗原检测试剂盒检测血清显示，13份样本中有8份样本血清学检测为阳性，5份样本血清学检测结果为阴性。本次检测的阳性率为61.54%。

2.2 PCR鉴定结果

对13份菌株进行RNA提取，反转率，并使用BVDV 5′UTR引物进行扩增，结果显示其中8份样本可以扩增大小为267 bp的片段，如图1，本次检测的PCR鉴定结果与血清学结果相符。……