李建梅 ，周 生 ，张 斌 ，姜 逸 ，徐 步 ，高明燕 ，俞 燕

（1.中国农业科学院家禽研究所，扬州 225125；2.扬州市畜牧兽医站，扬州 225000）

SAMHD1（SAM domain and HD domaincontaining protein 1）主要存在于单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞等髓系细胞中，是近年来新发现的一种宿主限制因子[1-2]。SAMHD1具有抵抗病毒感染、参与肿瘤免疫、激活细胞凋亡、调节天然免疫并参与先天性免疫信号通路等生物学活性[3-6]。研究发现，SAMHD1能够抑制很多逆转录病毒转录，如慢病毒属的人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）、α反转录病毒属的劳氏肉瘤病毒（Rous sarcoma virus，RSV）、β反转录病毒属的梅森-菲舍猴病毒（Mason-fisher monkey virus，MPMV）及γ反转录病毒属的鼠白血病病毒（Murine leukemia virus，MLV）等[7]。此外，SAMHD1对牛痘病毒（Vaccinia virus）、Ⅰ型单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus type I，HSV-1）及乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）等DNA病毒同样具有抑制作用[8]。SAMHD1主要通过其dNTPase活性与核酸外切酶活性发挥抗病毒作用[9-10]。

目前关于鸡源SAMHD1（chSAMHD1）及其功能的研究报道较少。实验证实，鸡源SAMHD1蛋白同样具有dNTP水解酶和核酸酶活性，提示其可能具有抗病毒功能[11-12]。本研究根据鸡源SAMHD1基因设计特异性引物并对chSAMHD1基因进行克隆，成功构建标准阳性质粒pMD-chSAMHD1。并在此基础上，建立了chSAMHD1基因的实时荧光定量PCR检测方法，将其应用于SPF鸡正常组织器官中chSAMHD1基因表达量的检测。本研究为chSAMHD1的定量检测提供技术支持，也为进一步研究病原微生物与宿主分子间的相互作用机制提供准确、有效的检测工具。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 TaKaRa LATaq® with GC Buffer、PremixTaqTM、TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0、pMDTM19-T Vector Cloning Kit、E.coliJM109 Competent Cells、TaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0、DL2000 DNA marker、TB Green®Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNaseH Plus）等均为TaKaRa公司产品；鸡外周血淋巴细胞分离液试剂盒为北京索莱宝科技有限公司产品；ABI-7500荧光定量PCR系统和ABI-2720普通PCR仪购自ABI公司；6131核酸蛋白快速检测仪购自Eppendorf公司。……