王宇飞，孙 伟，陈佶慧，刘芹防，滕巧泱，杨健美，苑纯秀，李泽君，李雪松,3，关平原

（1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特010018；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；3.中国农业大学 动物医学院，北京 100193）

鸭病毒性肝炎主要由鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）1、2、3型[1]3种不同血清型引起的，其中DHV-1是于1945年首次在美国长岛被发现的一种高传染性疾病的病原体[2]。根据系统发育分析和中和试验，在基因型和血清型综合考虑下将DHV-1分类为：DHAV-1（世界传统血清型）[3]、DHAV-2（在中国台湾分离的血清型）[4]和DHAV-3（韩国和中国大陆分离的血清型）[5]。DHAV-1属于小RNA病毒家族中的一个新属[6]，由单股正链的RNA组成，长度约为7.8 kb，不分节段，有感染性[7]。

鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种急性致死性疾病，其特点是传播快、病程短、发病急、病死率高等[8]，主要发生在3周龄以内的雏鸭中，以1周龄内雏鸭最为易感[9]，解剖学上主要有肝坏死、出血的病变[10]，其病死率可达90%～100%，是危害养鸭业最为严重的传染病之一。我国山东地区某养鸭场患病鸭中，主要以一周龄以内的雏鸭发病居多，可造成雏鸭大量死亡，病死鸭呈角弓反张样，肝脏常有出血病变。本研究对病死鸭肝脏进行病毒分离鉴定、序列进化树分析和动物回归实验，得到两株致病性不同的DHAV-1毒株。

1 材料与方法

1.1 主要材料 山东省某鸭场送检病料，PCRMIX试剂盒购自Vazyme公司；RNA提取试剂盒购自Tiangen公司；反转录试剂盒和定量PCR试剂盒购自宝生物工程（大连）有限公司；SPF鸭胚购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1.2 病料的处理 剪取患病雏鸭脏器部分组织，与加入青霉素和链霉素的PBS缓冲液混合，放入预冷的研磨盘研磨3 min，12 000×g离心10 min，取上清液作为待检样品。……