沈 达，王 健，宋海港，邱 添，徐 强，成大荣*

（1．扬州大学兽医学院，江苏 扬州 225000；2．江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300）

大肠埃希菌是人和温血动物肠道内正常菌群成员之一，在人或动物出生的数小时后经过口进入消化道后段，繁殖定居且终生伴随[1]。致病性大肠杆菌仅是大肠杆菌中的一小部分，但大量繁殖会给人类带来生命威胁和财产损失，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引发严重腹泻和败血症[2]，引起大面积的发病和死亡。目前主要应用抗生素治疗该病，从而导致临床上的耐药菌株越来越多，并且会不断产生许多新的耐药菌株，进而应用抗生素治疗的效果较差[3]。本试验以水禽源大肠杆菌为研究对象，研究其在江苏地区的流行情况及对分离株的药物敏感情况，为高效快速防治水禽源大肠杆菌提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品采集

2017～2019年共采集江苏省10个地级市64个水禽养殖场的疑似大肠杆菌性腹泻510份泄殖腔拭子，样品来源信息见表1。

表1 样品来源Tab.1 Sample source

1.1.2 试验试剂

琼脂糖购自索莱宝生物有限公司；10×TBE缓冲液购自生工生物工程股份有限公司；DL2000 DAN Marker购自Mix购维诺赞生物公司；麦康凯琼脂培养基、普通肉汤培养基购自广东环凯微生物公司。

1.1.3 PCR引物

根据陈晓浪等[4]的研究报道，基于对不同毒力基因序列的分析设计引物。PCR引物序列见表2。由生工生物工程（上海）股份有限公司合成引物。

1.2 试验方法

1.2.1 参考菌株及待检样品基因组的提取

以 F1+大 肠 杆 菌（C1253-77株）、P+大 肠 杆 菌(C1976-79株)、LEE+大肠杆菌（S442712株）、沙门氏菌（ATCC25923株）、HPI+大肠杆菌（S452631株）为参考菌株建立水禽源致病性大肠杆菌PCR检测方法。……