车巧林，胡 芳，沈晓红，董彦鹏，靳蒙蒙

（江苏南农高科技股份有限公司，江苏 江阴 214400）

猪肺炎支原体（mycoplasma hyopneumoniae）可引起猪地方流行性肺炎，俗称气喘病。该病以咳嗽和气喘为主要临诊症状，不同年龄猪群均易感染[1]，剖检变化为肺的尖叶、心叶和隔叶呈对称性的虾肉样病变。猪肺炎支原体感染导致猪的生长受阻，饲料转化率降低，机体免疫能力降低，导致免疫抑制[2]。

猪肺炎支原体的抗原主要由蛋白质与脂质组成，其中蛋白是产生免疫反应的主要免疫原之一[3]。P46是猪肺炎支原体的细胞膜表面抗原蛋白，可引起宿主早期免疫应答反应。P46在种内保守性高。熊焰等[4]对MY99株进行连读的人工传代后，发现P46仍然具有很好的稳定性和免疫原性。P46蛋白与猪鼻支原体、猪滑液支原体和猪絮状支原体等病原体之间无交叉反应，且能在猪肺炎支原体感染后两周内检测到相应的抗体[5]。因此，P46常常被用在诊断试剂的开发研究中。Bouh等[6]利用p46蛋白制备的单克隆抗体建立用于检测猪肺炎支原体的ELISA方法，该方法具有良好的特异性和敏感性。本研究应用P46单抗作为“探针”抗体先建立猪肺炎支原体不同CCU含量的蛋白免疫印迹（Western blot，WB）图谱，然后测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量，并与WB图谱测定的CCU进行比较，以建立一种猪肺炎支原体抗原含量快速测定的方法。

1 材料与方法

1.1 菌种

猪肺炎支原体HN0613株由江苏南农高科技股份有限公司鉴定和保存。

1.2 试剂及仪器

Friis基础液、Friis培养基由江苏南农高科技股份有限公司自制；……