罗 辉，陈 洁，邵 敏，曾 菲，万 力，朱圆玉，胡有生,3

万安玻璃红鲤鱼PKR的克隆鉴定与系统进化分析[4]

罗 辉1，陈 洁1，邵 敏1，曾 菲2，万 力1，朱圆玉1，*胡有生1,3

（1. 井冈山大学医学部，江西，吉安 343009；2.吉安县疾病预防控制中心，江西，吉安县 343100；3.南昌大学抚州医学院，江西，抚州 344000）

本研究以万安玻璃红鲤鱼为材料，通过同源克隆的方法克隆了万安玻璃红鲤鱼双链RNA激活的蛋白激酶(PKRCcvwPKR)，并首次克隆到CcvwPKR的剪接异构体。CcvwPKR全长为2145 bp，编码714个氨基酸，CcvwPKR剪接异构体全长1431 bp，编码476个氨基酸。CcvwPKR的剪接异构体是CcvwPKR第477个密码子的G突变为T（gaa477taa），从而使得CcvwPKR的翻译提前终止。氨基酸序列比对和空间结构SMART预测显示，CcvwPKR和CcvwPKR剪接异构体都含有三个双链RNA结合模体（dsRBM），CcvwPKR剪接异构体缺失PKR的C端的激酶结构域。系统进化分析表明，万安玻璃红鲤鱼PKR在进化上与鲤鱼和鲫鱼密切相关。万安玻璃红鲤鱼和目前已有研究的鲤科鱼类PKR一样，分子结构都含有三个dsRBM，三个dsRBM使得其具有更强的结合dsRNA的作用，推测可能与其较强的抗病能力有关。

万安玻璃红鲤鱼；双链RNA依赖的蛋白激酶; 基因克隆；基因鉴定

双链RNA(dsRNA)依赖的蛋白激酶（PKR），是细胞中重要的dsRNA传感器，能够识别并结合病毒dsRNA，引起抗病毒免疫反应。PKR也可识别并结合细胞在各种刺激作用下产生的内源性的dsRNA，并引起的抗肿瘤免疫反应。PKR结合dsRNA后，发生二聚化活化，活化后的PKR可磷酸化真核细胞初始化因子2α（subunt of eukaryotic intiation factor 2，eIF-2α），从而抑制蛋白翻译的起始，抑制病毒繁殖或引起肿瘤细胞的凋亡[1-2]。

PKR的结构包括N端的dsRNA结合结构域（dsRNA-binding domain，dsRBD），主要介导PKR与dsRNA的结合并引起PKR的二聚化活化，因此其识别和结合dsRNA的能力就直接影响PKR的活化，所以又称为PKR的活性调节结构域；……