邹康平，王 冬，郑 平

（常州市金坛区检验检测中心，江苏常州 213251）

罗丹明B也被称为碱性玫瑰精，属于一种颜色为鲜桃红色的人工染料，其本身具备持续鲜艳的一种荧光特性和较为理想的脂溶性，因为其本身的毒性较高，同时残留也较高，因此人体长期接触会存在致癌、致畸及致突变的影响，因此部分国家命令禁止将其添加到食品中，但仍然有一些商家为了个人利益不规范使用。当前，针对食品中罗丹明B使用的检测方式一般都是运用高效液相色谱-荧光法及高效液相色谱-质谱法两种方式，这两种方式都能够满足检测提出的要求[1]。但是两种方式存在的差异主要是停留在对样品进行提取和净化上，当前实验室普遍使用的检测方式是SN/T 2430—2010进出口食品中罗丹明B的一种检测方式。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

AB SCIEX QTRAP 4500型三重四级杆串联质谱仪；Waters e2695型高效液相色谱仪；AB204-S型电子分析天平；H1850R型台式高速离心机；Fotector Plus型高通量全自动固相萃取仪；AutoEVA-60型全自动平行浓缩仪[2]。

甲醇和乙腈，丙酮和正己烷，色谱级；罗丹明B标准品，纯度95%；Oasis MCX固相萃取柱和Oasis HLB固相萃取柱都需要控制在60 mg/3 mL，3 μm。

1.2 实验方法

1.2.1 提取

（1）丙酮提取。选择2.0 g食用油样品将其放置在容量为50 mL的离心管中，进行涡旋溶解后添加10 mL丙酮，通过MCX小柱完成净化，在实际使用前需要分别使用3 mL甲醇和3 mL的水活化，再使用3 mL丙酮和3 mL甲醇进行淋洗，然后将淋洗液去除，在使用3 mL的5%氨水甲醇完成洗脱，随后完成洗脱液的收集，并将其放置在40 ℃的条件下用氮气吹干，随后添加1 mL流动相完成复溶，在通过0.22 μm滤膜后，放置等待检测[3]。

（2）乙腈水提取。选择样品共计2.0 g将其放置在容量为50 mL的离心管中，添加10 mL 浓度为70%的乙腈水进行3 min的涡旋，同时需要使用超声完成20 min的提取。使用转速在4 000 r/min完成5 min的离心，随后选择其中的上清液，将其使用0.22 μm的滤膜进行过滤后，放置等待检测。

（3）乙腈水-正己烷提取。选择样品共计2.0 g将其放置在容量为50 mL的离心管中添加容量为10 mL 70%的乙腈水溶液进行3 min涡旋，随后添加容量为5 mL的正己烷继续进行涡旋振荡，超声提取20 min[4]。将其放置在4 000 r/min完成5 min的离心后将上层正己烷层去除，下层液体在使用0.22 μm滤膜之后，放置等待检测。

1.2.2 色谱条件

色谱柱：Waters C18和RRHD（1.8 μm，2.1 mm×100 mm）；流动相：选择浓度为0.1%的甲醇水溶液与乙腈；流速：0.3 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：2 μL。

1.2.3 质谱条件

电喷雾ESI离子源；正离子的扫描模式；采取多反应检测的模式（MRM）。

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的选择

罗丹明B本身容易溶于水、甲醇以及乙腈能够微溶在丙酮，对于辣椒油和花椒油等部分食用油的样品分别使用丙酮、70%的乙腈水及70%的乙腈水-正己烷溶液进行提取，能够获得比较理想的提取效果。3种提取液其填加定量标准物的回收率需要保持在89.2%～98.6%，丙酮提取液和70%乙腈水其提取液的提取效果大致相同，70%乙腈水-正己烷提取液的平均回收率需要控制在90%，相比其他2种提取液低一些，这主要是因为少量罗丹明B已经在正己烷溶剂里残留。添加正己烷后尽管可以将取液里的油脂快速去除，可是也减少了罗丹明B本身的提取率，综合考虑其并不需要正己烷去完成净化处置。对于食用油样品需要使用浓度为70%的乙腈水溶液提取就能够完成分析检测，运用丙酮提取还需要过柱净化，整体分析需要使用浓度为70%的乙腈水将其作为提取溶液[5]。

2.2 固相萃取柱净化

按照罗丹明B结构里包含的氨基和羧基以及苯环，需要分别选择阳离子交换固相萃取柱及反相固相萃取柱针对净化效果进行考察。并且需要按照实验方式去针对样品展开净化，以Oasis MCX柱净化其得到的回收率可以达到95.2%±2.0%，将Oasis HLB柱进行净化的回收率能够达到89.4%±3.2%，二者都可以对罗丹明B提出的分析检测要求给以满足。二者进行对比，Oasis MCX柱当前的回收率相对较高并且操作上也更加简单，提取液并不要求将有机溶剂进行去除就能够进行柱净化，所以最终确认Oasis MCX柱为净化萃取柱。

2.3 标准曲线和检出限

罗丹明B其浓度需要保持在1.0～100.0 ng/mL的范围中保持呈线性的分布，其线性回归的方程为Y=9 035.1X+855.8，相关系数需要保持在0.999 8。使用空白基质完成罗丹明B标准品添加的方式，选择3倍信噪比针对罗丹明B的检出限进行计算，结果为0.5 μg/kg。

2.4 方法精密度和回收率

挑选辣椒油和黄豆酱以及花生样品，在其中加入含量不同的罗丹明B标准品，并且按照此实验方法完成所需要的处理，平行测定6份不同样品。由表1可知，最后得出样品其平均添加物质的回收率在90.3% ～ 96.8%，相对标准偏差（RSD）全部低于5%。结果可以看出，此方法具备理想的准确性以及可靠性。

表1 精密度和回收率

3 结论

本文简述了罗丹明B的毒性，并且使用高效液相串联质谱的检测方式，对比多种溶剂在提取获得的效果，并且使用MCX固相萃取柱对其进行净化后，减少了样品产生的基质效应，并且能够有效地去除其中存在的杂质，空白样品加标回收及重复实用性比较理想。由此可以看出此方法具备快速、精准及灵敏度高的优势，因此适合针对食品中的罗丹明B进行定性及定量的分析，也能够为其他相似工业染料提供一种比较理想的检测方式。