王 岩

（陕西省宝鸡市食品药品检验检测中心，陕西宝鸡 721000）

油辣椒，又称油泼辣子，是一种地道的陕西本土美食，在陕西菜中极具代表性，是陕西八大怪之一，俗称“油泼辣子一道菜”。作为一个土生土长的陕西人，无论是吃面食还是调凉菜，都离不开一勺红亮诱人的油辣椒。近年来，一些不法食品加工经营者，为了提味增香，增加顾客回头率，在油辣椒中违法添加非食用物质罂粟壳，被依法查处。2016年，宝鸡市食品药品监管部门在凤县一面皮摊主侯某的自制油辣椒中检出罂粟壳成分。2017年，西安市食品药品监管部门在一热米皮店自制的油泼辣子中检出“罂粟回味粉”。2021年江苏省连云港市公安部门接群众举报，在一凉皮店的油辣椒中检出罂粟碱、那可丁等违禁物质。为了吸引顾客、牟取暴利，违法添加罂粟壳的案件屡见不鲜[1]，其中，火锅、麻辣烫、油泼辣子成为了违法案件发生的重灾区[2-3]。

罂粟壳，又称“御米壳”，为植物罂粟的成熟干燥的果壳，其中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因和那可丁等生物碱类物质虽然含量较少，但如果长期食用，会对人体精神系统造成损害，具有成瘾性，可能引起慢性中毒，是国家明令禁止添加的非食用物质。在2008年和2011年，我国卫生部发布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》第一批[4]和第五批[5]中明确禁止火锅底料及小吃类产品添加罂粟壳。

目前，食品中罂粟壳等生物碱的检验方法有薄层色谱法[6]、高效液相色谱法[7]、高效液相色谱串联质谱法[8]等，其中高效液相色谱串联质谱法是最为快捷高效的检验方法。油辣椒中罂粟壳等生物碱的检验目前尚无国家标准方法，本研究参考国家市场监督管理总局推荐的补充检验方法（BJS 201802）《食品中吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的测定》和《食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法》（DB 31/2010—2012），旨在建立一种适用于油辣椒中吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因的高效分析方法，以提高地方特色美食油辣椒中罂粟壳类生物碱的检出效率。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

液质联用仪(岛津公司LCMS8030)；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司SQP Practum224-1CN）；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司CPA225D）；超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司KQ-200KDE）；离心机（湖南沪康离心机有限公司TG16-WS）。

盐酸罂粟碱（纯度100%，批号171214-201906）、磷酸可待因（纯度96.9%，批号171203-201808）、吗啡（纯度93.6%，批号171201-201825）、那可丁（纯度100%，批号171224-201605）、蒂巴因（纯度100%，批号171216-201805）标准物质购于中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇、甲酸、甲酸铵（色谱级）；PSA、C18、无水硫酸镁、无水醋酸钠、实验用水为超纯水。油辣椒样品购买于宝鸡市各大超市。

1.2 仪器分析条件

1.2.1 液相色谱条件

色谱柱：Waters BEH HILIC（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相为：A相为0.1%甲酸-乙腈；B相为0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸铵；流速0.3 mL/min；进样体积5 μL；柱温40 ℃；梯度洗脱时间程序见表1。

表1 梯度洗脱时间程序

1.2.2 质谱条件

离子化方式：正离子源喷雾（ESI+）；多反应监测模式（MRM）；离子源接口电压4.5 kV；雾化气（N2）流速为3.0 L/min；干燥气（N2）流速为15.0 L/min；碰撞气为氩气；脱溶剂管温度为200 ℃；加热模块温度为400 ℃。MRM参数见表2。

表2 五种罂粟壳类生物碱的MRM参数

1.3 样品的制备

称取2 g样品（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入5 mL水，振摇使其分散均匀，加入15 mL乙腈，涡旋振荡1 min，加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠的混合粉末，迅速振摇，涡旋振荡1 min，以4 000 r/min离心5 min，取上清液待净化。称取100 mg PSA，200 mg无水硫酸镁，200 mg C18粉末置于50 mL离心管中，移取3.0 mL上清液至此离心管中，涡旋混合1 min，以10 000 r/min离心2 min，上清液过0.22 μm滤膜，用于测定吗啡、可待因，继续过滤，取1.25 L滤液至25 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用于测定罂粟碱、那可丁、蒂巴因。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

本实验选用沃特世公司BEH HILIC色谱柱对罂粟壳中5种生物碱成分进行分离，BEH HILIC色谱柱是亲水保留型色谱柱，可以有效地提高极性化合物的保留效率，增强质谱的信号响应，罂粟壳等生物碱在BEH HILIC色谱柱上吸附-解吸能力不同[9]，能得到很好的分离。因为5种生物碱的极性不同，所以本实验采取梯度洗脱的方式，以乙腈和甲酸铵为流动相，分别加入0.1%的甲酸，保证了酸性的流动相体系。首先采用高比例的有机相乙腈将极性大的成分洗脱出来，后逐渐加大水相比例，使极性弱的成分洗脱出来，出峰时间短，峰型无拖尾，使罂粟壳中5种生物碱成分得到很好的分离。实验结果表明，运行梯度洗脱程序6 min，可以有效的洗脱出5种待检的罂粟壳成分，具体见图1。

图1 5种罂粟壳类生物碱的MRM色谱图

2.2 质谱条件的优化

本实验分别称取盐酸罂粟碱、吗啡、磷酸可待因、那可丁、蒂巴因5种标准物质，用甲酸-甲醇溶液（0.5%）配制成标准储备液，再用乙腈稀释至合适的浓度，经两通直接进入质谱检测器，采用MRM多反应监测模式，ESI+正离子扫描，进行母离子扫描和子离子优化，优化后的质谱参数见表2，以响应值大的作为定量离子，响应值小的为定性离子。

2.3 样品前处理方法的选择

因为油辣椒样品中含有大量的色素和脂肪酸，在样品前处理过程中要同时考虑样品的提取、杂质的去除和提高回收率等方面，因而采取QuEChERS法进行样品的提取和净化。首先加入一定量的水分散样品，采用乙腈将油辣椒中的罂粟壳生物碱提取出来，加入无水硫酸镁和无水醋酸钠混合粉末可以帮助罂粟壳类生物碱从水相中提取到有机相中，同时除去待测样品中的水分，接着加入PSA和C18粉末能够有效去除油脂中的脂肪酸和色素等[10]。采取QuEChERS法得到的样品溶液不仅无明显的杂质干扰，而且回收率和灵敏度较高，同时节约了分析时间。

2.4 线性范围和检出限

在上述色谱和质谱条件下，吗啡和可待因在2.5～100 ng/mL，罂粟碱、那可丁、蒂巴因在0.05～2.0 ng/mL，峰面积和浓度均呈现良好的线性关系，相关系数值均大于0.995。按照吗啡、可待因检出限浓度12 μg/kg，罂粟碱、那可丁、蒂巴因检出限3 μg/kg加标至阴性油辣椒样品中，采用2.3的方法提取，样品溶液上机检测，得出的5种生物碱的信噪比均大于3，认为实验室条件符合检出限要求，吗啡、可待因检出限为12 μg/kg，罂粟碱、那可丁、蒂巴因检出限为3 μg/kg，灵敏度均高于《食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法》（DB 31/2010—2012）中各物质的检出限，见表3。

表3 5种罂粟壳类生物碱的线性试验结果

2.5 回收率及精密度试验

选取油辣椒阴性样品，称取12等份，分为两组，每份质量为2.0 g，分别加入不同浓度的标准品混合溶液，制成高低两种浓度的样品，按照上述条件检测，每个水平重复检测6次，结果表明，方法的精密度和准确度较高（表4）。

表4 5种罂粟壳类生物碱的回收率和精密度（n=6）

2.6 实际样品检测

为进一步验证本方法的方法适应性，选取宝鸡市市场销售的油辣椒样品进行检测，检测结果均为未检出，与《食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法》（DB 31/2010—2012）中方法检出的结果一致，后续将继续抽取更多的油辣椒样本进行检测，以优化本检验方法。

3 结论

油辣椒中的吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因5种生物碱尚无国家标准检验方法，本研究参考国家市场监督管理总局推荐的补充检验方法《食品中吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的测定》（BJS 201802）和《食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱法》（DB 31/2010—2012），建立了5种生物碱的液质联用检测方法，经验证，方法准确性、重复性好，是一种可靠的检验方法。