马光宇 秦晓培 宋林

摘要 目的：对淫羊藿骨碎补钙片的食用安全性进行毒理学研究。结论：淫羊藿骨碎补钙片急性毒性分级属无毒级，无遗传毒性，最大无损害作用剂量大于3.33g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的100倍。淫羊藿骨碎补钙片在本研究剂量范围内是安全的。

关键词：淫羊藿;骨碎补;钙;安全

骨质疏松症是一种骨骼系统疾病，多由骨量减少、骨骼微细结构破坏、骨骼脆性增加、易于骨折等原因引起[1]。目前，骨质疏松症成为继心血管疾病、糖尿病之后的第3种常见多发的慢性疾病。本品研究一种具有增加骨密度作用的保健食品——是以中药淫羊藿、骨碎补加钙制成。本实验拟对淫羊藿骨碎补钙片进行毒理学实验，进一步研究其安全性，为组方的安全使用提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1受试物  淫羊藿骨碎补钙片  人体推荐量2g/d，其中含淫羊藿提取物0.3g，骨碎补提取物0.15g，钙0.42g，酪蛋白磷酸肽0.15g。

1.1.2实验动物  清洁级健康小鼠和SD大鼠。

1.1.3菌株 选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌，共四株， 即 TA97a、TA98、TA100、TA102，经生物学鉴定合格。

1.1.4实验仪器  电子天平，Abacus全自动血液分析仪， Li- asys全自动生化分析仪，Olympus显微镜， 恒温水浴箱。

1.2方法

1.2.1 大、小鼠急性毒性试验  均按最大耐受量试验方法。实验前隔夜禁食， 不禁水。剂量为20g/kg体重，灌胃量为20ml/kg体重，给药后观察2周，判定其最大耐受量（MTD），评价其急性毒性强弱。

1.2.2 遗传毒性

1.2.2.1 小鼠骨髓细胞微核试验 小鼠每组10只，雌性各半，受试物设3个剂量组，2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及阴性（无菌水）、阳性（环磷酰胺40mg/kg）对照组。按常规进行实验。

1.2.2.2 小鼠精子畸形试验  小鼠每组10只，受试物设3个剂量组，2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg及阴性（纯化水）、阳性（环磷酰胺40mg/kg）对照组。按常规进行实验。

1.2.2.3  Ames试验 采用标准平板掺入法在加和不加S的条件下进行，实验设 5个剂量， 5000μg/皿、1000μg/皿、200μg/皿、40μg/皿、8μg/皿， 另设空白对照、溶剂对照 （无菌水） 、阳性对照组， 阳性物为9 -氨基吖啶、2.7 -氨基芴、叠氮钠、2 -乙酰氨基芴、丝裂霉素C。实验结果以各剂量组与阴性对照组平均回变菌落数的比值（MR）来判断。

1.2.3 大鼠30d喂养试验 动物随机分成4组，每组20只，雌雄各半，受试物设3个剂量组，1.17g/kg、2.33g/kg、3.33 g/kg，另设阴性对照组，经口给药，按不同剂量要求将样品均匀拌入基础饲料。大鼠2只/笼饲养，自由进食饮水。连续观察30d，每周记录体重和进食量并计算食物利用率，实验期末断头取血、处死，对每只大鼠进行脏器大体观察，同时取肝、肾称重并计算脏体比，同时进行血象、血生化检查，并取肝、肾、胃肠进行病理组织学检查，常规制片，H-E染色。

1.3 统计学处理

数据采用SPS 12.0 forWindows统计软件包分析， 采用OneWayANVOA分析， 差异显著性检验水准为0.05。

2结果

2.1 大、小鼠急性毒性试验

实验期间， 各大、小鼠均未出现异常症状、体征， 也无死亡。淫羊藿骨碎补钙片对雌、雄性小鼠和雌、雄性大鼠经口MTD均大于20.0g/kg体重，属无毒级。

2.2 遗传毒性试验

2.2.1 小鼠骨髓细胞微核试验  结果显示阳性对照组微核率高达1.88% - 1.92%，而剂量组的微核率在0.12%-0.16%。与阴性对照组（0.14%-0.16%）相比差别无统计学意义（ P>0.05）， 提示淫羊藿骨碎补钙片对小鼠骨髓细胞染色体无明显断裂效应。

2.2.2 小鼠精子畸形试验  结果显示各剂量组的精子畸形率在1.66%-1.80%， 与阴性对照组（1.88%） 相近，而阳性对照组的精子畸形率高达5.64%，提示淫羊藿骨碎补钙片对小鼠精子形态无影响。

2.2.3  Ames试验 淫羊藿骨碎补钙片各剂量组回变菌落数与阴性对照组比较均无明显差异。未见淫羊藿骨碎补钙片有致突变作用。

2.3 大鼠30d喂养试验

2.3.1 生长发育   试验期间， 大鼠生长良好，各剂量组大鼠均无异常症状和体征，也无死亡。经方差分析检验，各剂量组动物的体重、进食量、食物利用率与阴性对照组比，差别无统计学意义（ P>0.05） 。

2.3.2血常规及生化检查  各剂量组与阴性对照组比，差别无统计学意义 （ P>0.05） 。

2.3.3 病理组织学检查 解剖时大体观察未见异常， 脏器系数各剂量组与阴性对照组比较未见明显差别。镜下观察对照组和剂量组动物的肝、肾、胃、十二指肠均未见明显的病理改变。

3结论

实验结果表明：淫羊藿骨碎补钙片雌雄性大、小鼠经口MTD大于 20.0 g/kg体重， 根据急性毒性分级标准， 属无毒级;小鼠精子畸形试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验三项遗传毒性试验结果均为阴性;30d喂养试验显示大鼠体重、总食物利用率、血常规、血液生化指标、脏体比以及肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸和卵巢的病理组织学检查均未见异常改变。得出淫羊藿骨碎补钙片的最大无损害作用剂量大于3.33g/kg体重， 相当于人体推荐摄入量的100倍。综上所述， 淫羊藿骨碎补钙片在本研究剂量范围内是安全的。

参考文献

[1]李祥雨，姜勁挺，李建国，等.骨质疏松症中药防治研究进展.中国骨质疏松杂志.2018，24（2）：270-275.