1株猫杯状病毒的分离鉴定及其ORF2序列的遗传演化分析
2021-02-07李鑫杨德全葛菲菲沈海潇刘健鞠厚斌王建赵洪进
李鑫,杨德全,葛菲菲,沈海潇,刘健,鞠厚斌,王建,赵洪进
(上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103)
猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)是猫科动物中广泛传播的病原之一,易感猫常因接触病猫或其分泌物、排泄物及被污染的笼具等而发病,临床出现口腔溃疡、鼻-结膜炎、跛行、流产和肺炎等症状,严重的甚至可导致死亡。此外,有研究表明,FCV在临床健康猫中带毒率也较高,临床健康猫呈持续感染状态,这就有利于病毒在猫群中的传播,导致病毒发生变异,产生致死性毒株[1]。由于猫杯状病毒变异程度高,不同毒株间差异较大,现有的疫苗免疫保护效果并不理想。
FCV核酸类型为单股正链RNA,含有3个开放阅读框(open reading frames,ORFs),即ORF1、ORF2和ORF3。ORF1编码病毒的非结构蛋白;ORF2编码衣壳蛋白,为病毒的主要结构蛋白;ORF3编码一个较小的结构蛋白。ORF2可分为A~F 6个区域,其中A区经蛋白酶切割形成成熟的衣壳蛋白,E区含有主要B细胞表位[2]。
FCV对猫肾细胞(CRFK,F81)、犬肾细胞(MDCK)等多种细胞敏感[1,3-4],病毒在细胞上可获得较高的病毒滴度。本研究从发病宠物猫的鼻拭子中,用F81细胞分离获得1株FCV,并进行了全基因组扩增和序列测定,对其ORF2基因进行比较与分析,为研究FCV的分子生物学和将来疫苗株的研发提供了参考和依据。
1 材料与方法
1.1 样品
猫鼻拭子样品采集自上海某宠物医院的发病宠物猫。该病猫为雌性狸花猫,2月龄,未进行疫苗免疫,主要症状为口炎。
1.2 细胞和主要试剂
F81细胞,购自北纳创联生物科技有限公司;RNA提取试剂盒,购自Magen公司;猫杯状病毒荧光RT-PCR检测试剂盒,购自书扁科技(上海)有限公司;……
