李建，姚望，杜星，潘增祥，李齐发

(南京农业大学动物科技学院，江苏 南京 210095)

微小RNAs(microRNAs，miRNAs)是一类长度20～22个核苷酸的非编码RNA分子(non-coding RNAs，ncRNAs)。研究发现，miRNAs主要通过转录后水平沉默靶基因表达，进而在各种组织和器官的多种细胞生理和病理过程中发挥至关重要的作用[1-2]。在哺乳动物卵巢组织中，miRNAs在卵母细胞、体细胞(如颗粒细胞)和卵泡液中广泛表达，并调控多种卵巢功能，从原始卵泡库的维持和起始，到排卵、黄体形成和卵巢老化[2-4]。在各种卵巢细胞中，卵巢颗粒细胞中miRNAs的研究最为深入，涉及各种颗粒细胞功能，如颗粒细胞增殖[5]、颗粒细胞凋亡[2]、颗粒细胞自噬[6]、类固醇激素分泌[7]和细胞周期等[8]。目前靶向卵巢颗粒细胞凋亡的miRNAs研究最多，如miR-26b[5]、miR-425[9]、miR-1306[10]和miR-204[11]等。基因内miR-126通过靶向抑制TGFB2基因，抑制卵巢颗粒细胞中TGF-β信号通路，进而促进颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁，介导高繁殖力候选基因NORFA对猪繁殖性能的调控[2]。众所周知，芳香化酶P450arom是卵巢颗粒细胞中雌激素合成通路的限速酶，其编码基因CYP19A1被发现受多个miRNAs如miR-1275[5]、miR-10b[12]和miR-27a-3p[13]等的直接或间接调控，从而介导miRNAs对颗粒细胞雌激素分泌的调控。但目前关于靶向调控卵巢颗粒细胞周期的miRNAs研究较少[8,14]。本文以猪卵巢颗粒细胞为研究对象，利用流式细胞技术分析miR-1307在颗粒细胞周期中的作用，以期为解析哺乳动物细胞周期的miRNAs调控网络提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验用新鲜卵巢来自南京禄口机场屠宰场的成年杜长大商品母猪。用75%酒精消毒后的手术剪将刚屠宰的母猪输卵管末端的卵巢剪下，简单清洗后将卵巢浸泡在37 ℃的生理盐水中，尽快运送回实验室。……