根癌农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化体系研究
2021-02-07黄运福贡莎莎孟庆玲张国武王熙凤才学鹏
黄运福,贡莎莎,孟庆玲*,乔 军 ,张国武,王熙凤,才学鹏
(1.石河子大学动物科技学院,新疆 石河子 832003; 2.中国兽医药品监察所,北京 100081)
捕食线虫性真菌(nematode-trapping fungi)是一类通过产生复杂的捕食结构来捕获和杀死线虫的丝状真菌,也是自然界中线虫重要的天敌和生防资源[1]。少孢节丛孢菌(Arthrobotrysoligospora)是捕食线虫性真菌中极具应用潜力的代表菌,是研究最多、应用最广的生防真菌之一[2]。目前,对少孢节丛孢菌的分子背景研究较为清楚,其全基因组的测序成功[3]为在分子水平研究少孢节丛孢菌以及菌株改造奠定了基础。
遗传转化是进行新基因功能研究和菌种改良的重要手段。丝状真菌转化方法有CaCl2-PEG介导转化法、电击转化法、限制酶介导整合法、醋酸锂转化法、基因枪法等,但这些转化方法或涉及原生质体的制备和再生,或花费高昂、应用范围窄,或转化效率低、遗传不稳定等,这些不足限制了它们在真菌研究中的应用[4]。根癌农杆菌介导的转化法(Agrobacteriumtumefaciens-mediated transformation,ATMT)利用农杆菌将供体质粒中转移的DNA(T-DNA)插入到宿主基因组中,具有操作简单、受体广泛、单拷贝插入、转化效率高和遗传稳定等优点,因此成为丝状真菌遗传转化的有效方法[5]。ATMT技术已经成功应用于黄曲霉菌[6]、指状青霉菌[7]、双孢蘑菇[8]等多种丝状真菌的转化。目前,少孢节丛孢菌成熟的遗传转化方法为以原生质体为受体的CaCl2-PEG介导法[9]和限制酶介导整合法[10-11],但以原生质体为受体的转化本身具有的缺点限制了它的应用,因此探索并建立一套高效稳定的遗传转化体系对于少孢节丛孢菌的分子生物学研究具有重要意义。……
