陈小飞，严 楠，张 斌，廖 明*

(1.华南农业大学兽医学院/人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室/广东省动物原性人兽共患病防控重点实验室/农业农村部人兽共患病重点实验室,广东广州 510642； 2.西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041)

A群轮状病毒(group A rotavirus，RVA)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus)，是仔猪以及其他幼龄哺乳动物胃肠炎的主要病原之一[1-4]。RVA跨越种间屏障，引起幼儿腹泻已被证实[5-7]。RVA是由11个不连续的双链RNA组成的无囊膜病毒，分别编码6个结构蛋白(VP1-VP4、VP6、VP7)和5或6个非结构蛋白(NSP1-NSP5/6)[8-10]。

据报道RVA的外衣壳蛋白VP7和VP4能诱导产生中和抗体，是构成G和P双重分型系统的核心[11]，至今RVA已确立了35个G基因型和50个P基因型[12-13]。VP6是RVs基因组的核心蛋白，占病毒蛋白的50%以上，是参与介导RVA黏膜免疫反应的特异性抗原，高度保守，具有较强的诊断学意义[8-10,14]。

随着PCR应用的推广，极大地满足临床诊断的时效性需求，由于荧光定量PCR的灵敏性高，已逐渐成为金标准，用于各种疾病的检测及监控。近年来已建立了RVA PCR检测方法[15-18]，但是由于RV的变异性，急需高效通用的检测方法。本研究根据最近5年来NCBI及本实验室分离鉴定并测序的结果，通过针对RVA VP6的保守序列设计引物、优化条件等建立了检测RVA的荧光定量PCR方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒株和临床样本 猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)疫苗株，广东永顺生物制药股份有限公司提供；猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，RRRSV)疫苗株，吉林硕腾国原动物保健品有限公司提供；猪A群轮状病毒RVA/Pig-tc/CHN/SCMY-A3/2017/G9P [23]、猪轮状病毒G9G3G4G5G26亚……