王 豪，郭苗苗，刘昕雨，左 瑶，李 宁，孙 薇，张 涛，王 令

(陕西理工大学生物科学与工程学院，陕西汉中 723001)

抗生素具有广泛和高效的抑菌或杀菌作用，被大量用于临床和畜牧业，预防或治疗病原菌感染导致的疾病。由于抗生素的过量使用和在环境中的残余，加快了微生物抵抗抗生素的进化速率。其中，携带分解抗生素的抗性基因是微生物抵抗抗生素的主要途径之一，抗性基因编码的特殊酶将抗生素分解成无毒性的物质，从而赋予微生物抗性[1-2]。

在自然界中，微生物通过基因融合、转导、转化等方式转移或重排获得抗性基因，造成耐药性大幅上升[3]。β-内酰胺酶基因(beta-lactamase，bla)是氨苄青霉素抗性基因，其编码的β-内酰胺酶被细菌分泌至胞外，抑制转肽反应并催化β-内酰胺环的水解，从而解除氨苄青霉素对细菌的毒性[4]。氨基糖苷磷酸转移酶(aminoglycoside phosphotransferase,Aph)利用ATP作用于特定的游离羟基使其磷酸化，抑制卡那霉素与核糖体结合，从而失去抗菌活力，表现为卡那霉素耐药性[5]。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是日本学者Notomi建立的一种新型核酸检测技术[6]。其核心是针对目标基因设计多对特异性引物，在链置换DNA聚合酶的作用下，60 ℃～65 ℃进行恒温扩增，1 h的时间即可实现109～1010倍的核酸扩增。此技术与PCR相比,对仪器要求较低，反应时间大大缩短，具有高特异性、高敏感性、实时定量和可视化检测等优势[7-9]。所以，LAMP技术广泛应用于各种核酸检测，特别是病原微生物的检测，如致病性细菌、真菌和病毒等[10-11]。

本研究针对bla基因和Aph基因，建立特异的LAMP扩增体系，以羟基萘酚蓝[12](HNB)作为指示剂，优化HNB浓度，检测反应灵敏度，验证该LAMP方法,成功实现环境微生物中抗性基因的可视化检测。……