张维 于珊珊 尹宏兵

(1长春中医药大学附属第三临床医院，吉林 长春 130000；2长春中医药大学 吉林省人参科学研究院)

鹿茸是雄鹿未骨化密生绒毛的幼角，是一种特殊的软骨组织，含有多种活性因子，是鹿体在骨化之前贮存生长因子最活跃的生长点。鹿茸多肽是鹿茸主要的生物活性成分物质，对成骨细胞、造血细胞、纤维细胞、上皮细胞生长及神经生长都有明显的促进作用。本研究探讨超声破碎法提取梅花鹿茸总多肽的效果及鹿茸总多肽的抗炎活性，为今后鹿茸总多肽的研究奠定基础，同时对于后续研究梅花鹿茸总多肽对炎症细胞的毒性作用的实验研究具有借鉴意义。

1 材料与方法

1.1鹿茸总多肽的超声波提取制备方法

1.1.1超声破碎时间对鹿茸总多肽提取的影响 称取新鲜的梅花鹿茸约20 g，剁成小块后放入烧杯中，用预先放于层析柜(4℃)冷却过的蒸馏水冲洗数次，直至完全无血色；粉碎机粉碎，加入预冷的匀浆液(pH3.5的冰醋酸水溶液)50 ml加入一定量的玻璃珠，置于4℃低温摇床中6 h后，冰浴条件下超声破碎(工作5 s,停止3 s)，于超声破碎的不同时间(0,10,20,30，40,50,60,80 min时)，吸取混合溶液1 ml,于4℃，10 000 r/min离心15 min后吸取上清液，保存于4℃中，测定蛋白浓度。

1.1.2制备鹿茸总多肽 称取新鲜的梅花鹿茸200 g，按照上述的操作方法，加入预冷的匀浆液500 ml，放于4℃的恒温摇床中6 h后，冰浴条件下超声破碎，待超声结束后，于4℃，10 000 r/min离心15 min，合并上清液，冷冻干燥获得粉末。称取20 mg冻干粉，溶解于1 ml的pH3.5的冰醋酸水溶液中，脱盐后，保存于-20℃中待用。……