颜帅 乐音子 王晓鹏

(南京中医药大学附属苏州市中医医院，江苏 苏州 215009)

胃肠道 Cajal间质细胞(ICC)是胃肠道慢波活动的起搏细胞，在调控胃肠道的运动中扮演重要角色，研究表明ICC数量、分布、形态和结构的异常变化与慢传输型便秘(STC)发病有密切关系〔1，2〕。而ICC细胞过度自噬是慢传输型便秘大鼠模型中ICC数量减少的关键，诱发ICC功能障碍，导致STC发生〔3～6〕。既往防治便秘的药物对ICC的影响多数还停留在整体动物实验水平，尚缺乏构建结肠 ICC自噬的模型。本研究完善结肠ICC的消化分离培养技术，探讨结肠ICC自噬模型的建立，为发展 ICC的新型药物或者诊疗手段提供理论依据。

1 材料与方法

1.1实验动物 SPF级SD大鼠30只，雌雄不限，体重200 g左右，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号为SCXK(湘)2016-0002。

1.2实验仪器 超净工作台(北京亚泰YT-CJ-2NB)；低速离心机(知信仪器SL02)；直热式二氧化碳培养箱(上海三藤仪器DH-160I)；解剖显微镜(上海光学仪器一厂XTZ-D/E)；倒置显微镜(北京中显恒业DSZ2000X)；无菌平皿(美国Corning)；200目细胞滤网(BD)；眼科剪刀、镊子(上海金粒医疗器械有限公司)；摇床、旋涡混合器(江苏其林贝尔)；精密PH计(雷磁E-201-C)；盖玻片、载玻片(海门远泰)；台式冷冻离心机(中国湖南湘仪H1650R)；电子天平(美国双杰JJ224BC)；电泳仪、电泳槽、转膜仪(北京六一)；磁力搅拌器(雷磁JB-13)；生物样品均质仪(杭州奥盛BioPrep-24)。

1.3实验试剂 M199培养基(Gbico)；胰酶消化液(美国Ameresco)；RIPA裂解液、青-链霉素(上海碧云天)；磷酸盐缓冲液(PBS，Hyclone)；胎牛血清(Gbico)；Ⅱ型胶原酶(COLLAGENASE)；Ⅰ型鼠尾胶原蛋白(北京索来宝)；L-谷氨酸(Sigma-Aldrich)；脱氧核糖核酸酶(DNase)Ⅰ(康为世纪)；……