马晓林，李远婷，田永芝，张建平，安登第

(1.新疆特殊环境物种多样性应用与调控重点实验室,新疆师范大学，乌鲁木齐 830054；2.新疆巴音郭楞蒙古自治州环境监测站，新疆库尔勒 841000 )

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 样品采集 以博斯腾湖大湖区布设的17个国家基准环境监测站位[23]中的2、6、8、11、12和14号共6个位点为研究对象(图1)，于2015年8月以活塞式柱状底泥采样器(KHT0204)收集40 cm厚度沉积物样品，以20 cm为梯度将其分为表层(0～20 cm)和深层(20～40 cm)共计12个样品，在无菌环境下充分混匀分装置-80 ℃保存。同时收集上覆水样品置于无菌瓶中-4 ℃ 保存。

1.1.2 培养基 铵盐富集培养基参照李焕等[24]配方的基础上做适当调整。磷酸二氢钠0.75 g，磷酸氢二钾0.25 g，硫酸铵2 g，硫酸镁0.01g，硫酸锰0.03 g，碳酸钠0.1 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.0，1×105Pa灭菌30 min，固体培养基加入15%的琼脂粉。

1.2 方 法

1.2.1 水体环境因子的检测 采用美国YSI EXO2多参数水质分析仪现场监测水体pH、溶解氧、温度及电离度。参照国标(GB11894-89)[25]碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法测定总氮含量；参照国标(HJ 537-2009 )[26]蒸馏-中和滴定法测定氨氮的含量。

1.2.2 沉积物微生物的富集培养 称取10 g沉积物样品到90 mL无菌水中，加入玻璃珠于摇床震荡3 h后静置30 min。吸上清菌液1 mL移至50 mL铵盐富集培养基中，25 ℃ 120 r/min避光培养30 d，从第9天起每3 d测定各培养液OD600值，掌握菌株的生长情况及菌液中亚硝酸盐的含量。N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法检验亚硝酸盐的生成[7]。

1.2.3 单菌的分离纯化 11个(20～40 cm)沉积物样品经富集培养21 d后(此时菌液中亚硝酸盐含量较高)取混合菌液做梯度稀释并以涂布法接种至铵盐培养基上于25 ℃培养。……