周万里 张建平▲ 潘永昇 徐卫东

1.南通大学附属海安医院泌尿外科，江苏南通 226600；2.江苏省南通市第一人民医院泌尿外科，江苏南通 226300

膀胱癌发病率在世界范围内居恶性肿瘤第九位，死亡率排名第十三位，为泌尿系统最常见的恶性肿瘤[1]，且其发病率呈上升趋势[2]，其中最常见的为膀胱尿路上皮癌[3-4]。非肌层浸润性尿路上皮癌患者多采用经尿道膀胱肿瘤电切术（TURBT），而晚期患者则需辅助全身放化疗[5-6]。研究膀胱癌的发病机制是国内外学者研究的重要课题[6]。细胞的凋亡与恶性增殖参与肿瘤的发生、发展[7]，其中Bcl-2 发挥抗凋亡作用，参与细胞癌变[8]。细胞自噬与细胞的癌变密切相关[9]。LC3 是自噬相关基因，参与自噬的调控[10-11]。本课题通过核酸干扰技术下调膀胱尿路上皮癌中Bcl-2 的表达，并研究细胞中LC3 表达及其对膀胱肿瘤细胞生物学行为的影响，分析其与临床病理的相关性，从而探讨Bcl-2 与LC3 的表达与膀胱癌临床病理和预后的相关性。

1 材料与方法

1.1 试剂

真核细胞表达载体pGenesil-1 购自上海生工，大肠杆菌DH5α 和人膀胱癌细胞株T24 为本实验室保存，高糖DMEM 培养基（货号：12800082）购自Gibco公司；RNA 抽提试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司（货号：SK1322）；MTT 购自Sigma（货号：M5655-1G）；DMSO 购自生工生物工程（上海）股份有限公司（货号：DN3039A）；Lipofectamine2000 购自Invitrogen（货号：11668-027）；LC3 和Bcl-2 兔抗人抗体购自Abcam（货号：ab192890、ab32124）；SP 免疫组化试剂盒（货号：SP0041）购自福州迈新公司。

1.2 体外实验

1.2.1 在膀胱尿路上皮癌细胞 （T24） 中转染siRNA在高糖DMEM 培养基中于37℃、5%二氧化碳条件下培养T24 细胞，以5×105个/孔的密度接种在6 孔板中，使用脂质体转染法，Lipofectamine2000 与重组质粒的比例为5∶1。……