章能胜，陈晓玲，胡丰林

(1.安徽卫生健康职业学院 医学系，安徽 池州 247099；2.安徽农业大学 安徽省微生物防治重点实验室，安徽 合肥 230036)

虫生真菌古尼拟青霉(PaecilomycesgunnniLiang)为古尼虫草[Cordyceps gunnii (Berk.)Berk.]的无性型[1]，其药用价值与古尼虫草相当[2]。近年来，古尼拟青霉活性研究主要集中在抗氧化[3]、镇静[4-5]、镇痛[6]和抗肿瘤[7]等。笔者前期研究发现古尼拟青霉有较强的清除自由基活性。本研究在前期研究基础上，利用响应面分析法(Response Surface Methodology，RSM )对古尼拟青霉中清除自由基活性组分超声波提取工艺进行优化，旨在为深度开发利用提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株

供试菌株古尼拟青霉(PaecilomycesgunnniLiang)，由安徽农业大学微生物防治省重点实验室提供，菌株号为RCEF4117。

1.1.2 培养基

固体培养基(g/L)：葡萄糖 40，蛋白胨10，酵母浸粉10，琼脂20，配置好后用蒸馏水定容。

1.1.3 主要仪器与试剂

Spectra Max M2型酶标仪，美国Molecular device公司；KH5200型超声波清洗器，昆山禾创超声仪器公司；LRT-250G型光照培养箱，广东省医疗器械厂；化学纯葡萄糖，中国医药集团上海化学试剂公司；蛋白胨，天津大茂化学试剂厂；酵母浸出粉，英国OXOID公司；分析级甲醇，上海建信化工有限公司；分析纯三氯甲烷，无锡市亚盛化工有限公司；分析纯乙酸乙酯，安徽淮南化学试剂厂，分析纯石油醚，上海化学试剂有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理

将灭菌培养基倒好培养皿后，将剪好的灭菌玻璃纸铺于培养基上，接种1 mL种子液于玻璃纸表面，放置于25℃培养箱中培养8天，刮取菌丝冷冻干燥备用。

1.2.2 清除自由基活性测定

本研究采用自由基为二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)，具体测定方法参考胡丰林的酶标仪实验法(DPPH-Microplate)[8]。……