李 萍，李艺杰，薛 玲，宋春红

（1. 青岛大学附属医院药学部，青岛 266001；2. 北京唯新唯实教育科技有限公司，北京102200；3. 山东中医药大学，教育部中医药经典理论研究重点实验室， 济南250355)

芍药苷（paeoniflorin）是中药白芍和赤芍的主要有效单体成分。近年来，芍药苷对神经系统的药理作用受到越来越多研究者的关注，其神经保护机制可能与多个受体和离子通道有关[1]。本课题组前期研究[2]发现，芍药苷可能通过调控L型电压依赖型钙通道（L-type voltage-dependent calcium channel，LTCC）显著改善经前烦躁障碍症（premenstrual dysphoric disorder，PMDD）肝气郁结大鼠的抑郁情绪，但具体作用机制尚待进一步探明。为解析芍药苷与LTCC的关系，本研究利用LTCC激动剂Bayk8644为工具药[3]，采用行为学和蛋白质印迹技术检测芍药苷对LTCC开放后大鼠行为学以及LTCC下游钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（calmodulin-dependent protein kinase type Ⅱ，CaMKⅡ）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factors，BDNF）表达的影响，以期揭示芍药苷的药理作用靶点。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雄性Wistar大鼠48只，体质量（130±10）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司[SCXK（京）2016-0006]。昼夜颠倒适应性饲养1周，饲养室温度（21±1）℃，相对湿度55%±5%，大鼠自由进食饮水[SYXK（鲁）2017-0022]。实验操作在暗淡的红灯（＜25 lux）下进行，对动物的操作遵遁我国相关法规。本研究通过山东中医药大学动物伦理委员会审核批准（SDUTCM20190727001）

1.2 药物与试剂

Bayk8644（L型钙通道激动剂）（B112-5MG）和二甲基亚砜（DMSO）（D2650-5X5ML）均购自美国Sigma公司；芍药苷（GR-133-161209）购自南京广润生物制品有限公司；尼莫地平（Nimodipine）（N7634-1G）购自美国Sigma公司；PVDF膜（Ipvh00010）和ECL发光液（P90720）均购自美国Millipore公司；CaMKⅡ抗体（Ab134041）、pho-CaMKⅡ抗体（Ab171095）和BDNF抗体（Ab108319）均购自英国Abcam公司；β-actin（TA-09）、羊抗兔二抗（ZB-2301）和羊抗小鼠二抗（ZB-2305）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；……