周 颖 侯 征 薛小燕 魏 明 李 汾 姚 佳 张 晔 汪 洋

1.西安医学院药理学教研室，陕西西安 710021；2.空军军医大学药理学教研室，陕西西安 710032；3.西安医学院分子病毒与病毒免疫学实验室，陕西西安 710021

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的群体感应系统-附属基因调节（agr）系统，调控多种毒力因子表达[1-3]，其中最重要的一类毒力因子是葡萄球菌溶素[4-6]。MRSA 还能够表达一些黏附蛋白，促进细菌生物膜的形成。这些毒力因子在MRSA 侵袭性感染过程中发挥重要作用[7-8]。RNAⅢ抑制肽（RIP）是agr 系统抑制剂。本研究设计合成了新的RIP 衍生物RIP1183，检测其对MRSA 的生长和生物膜形成的影响，以及在不同时相对重要毒力因子表达的影响，探讨RIP1183 抗菌、抗生物膜的作用机制。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

ELx800 酶标仪（美国Bio-tek 公司）；AL204 电子天平（梅特勒-托利多）；ZHWY-200D 恒温培养振荡器（上海智诚分析仪器制造有限公司）；MX3005P1 实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）仪（美国安捷伦）。微量RNA 提取试剂盒RNeasy Mini Kit（QIAGEN），细菌RNA 提取试剂盒RNAprep pure Bacteria Kit，反转录试剂盒PrimeScript Kit，Premix Taq RT-PCR 系统（TaKaRa）。异硫氰酸荧光素（FITC）、葡萄糖均购自Sigma 公司；胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养基购自北京陆桥技术有限责任公司。

1.2 菌株和药品

MRSA（USA300）由美国国立卫生研究院（NIH）的Michael Otto 教授友情惠赠。RIP1183 由本课题组设计，委托空军军医大学生物制药教研室合成，白色疏松粉末，批号：20141001，含量：99.41%，保存条件：-20℃低温保存。

1.3 细菌培养

按照1∶100 的比例接种MRSA（USA300）至5 mL的培养基中，37℃振荡培养14 h，将过夜培养的细菌分别转接至10 mL TSB 培养基 （含0.5%的葡萄糖），将细菌浓度调整至1×108CFU/mL。RIP 组加入RIP1183使其终浓度为50 μg/mL。对照组加入无菌磷酸盐缓冲液。……