张 平，袁晓慧，黄华坤，杨春梅，张露露，罗小辑，罗进勇*

(1.重庆医科大学 检验医学院 临床诊断教育部重点实验室,重庆 400016；2.重庆医科大学附属第一医院 骨科， 重庆 400016)

骨组织工程主要以种子细胞、诱导细胞因子、支架材料3者构建细胞生物材料复合体，是治疗由外伤、感染、肿瘤等因素导致骨缺损的理想手段[1]。间充质干细胞是一类多能祖细胞，来源于骨髓、脐带、滑膜等，可多向分化为骨及软骨、脂肪、肌肉等组织，是骨组织工程中重要的种子细胞[2]。骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)则是骨再生中诱导成骨分化的关键细胞因子之一。BMPs属于转化生长因子超家族，现已知包含15个成员，但仅BMP-2、4、6、7、9能诱导软骨及骨形成。其中重组人BMP2及BMP7已作为骨诱导剂应用于临床治疗骨不连及骨缺损[3]。本课题组前期研究发现BMP9在体内外促成骨能力最强，但机制尚不明确[4]。矮小身材同源框基因(short stature homeobox 2,Shox2)是同源框家族一员，编码含有DNA结合结构域的60个氨基酸残基基序蛋白质。在骨发育中，Shox2突变小鼠模型表现出肱骨股骨缺失导致的肢体缩短，且与软骨形成密切相关[5]，而SHOX2在成骨形成中的作用研究较少。此外，鼠科SHOX2蛋白与人同源性高达99%[6]。因此，本文通过体外实验在小鼠间充质干细胞C3H10T1/2细胞中过表达SHOX2，来探讨其对BMP9诱导的成骨分化影响。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠间充质干细胞系C3H10T1/2(美国典型菌种保藏中心， ATCC)；人胚肾HEK293和结直肠癌HCT116细胞系(本实验室保存)；高保真酶PrimeSTAR、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)定量底物(TaKaRa公司)；限制性内切酶BamHⅠ、XbaⅠ、PmeⅠ、PacⅠ，DNA连接酶(New England BioLabs公司)；胶回收试剂盒、质粒抽提试剂盒(Omega Bio-tek公司)；……