张艳玲，杨 磊，刘君伟，陈人智，马遇原，武永利，3

膝骨性关节炎(KOA)是由软骨外基质降解与修复动态失衡，致膝关节功能障碍的疾病。基质金属蛋白酶-1、13(MMP-1、13)可直接降解对软骨基质起支撑作用的Ⅱ型胶原，加重膝关节炎症反应和临床症状。抗炎因子白介素-10(IL-10)能够促进成骨细胞的增殖与分化，抑制破骨细胞破坏以减缓KOA进展。骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有免疫抑制和抗炎作用，在KOA软骨缺损修复治疗中具有重要作用，温针灸治疗KOA疗效确切[1]。本实验探讨温针灸联合 BMSCs 移植对KOA的治疗作用，研究其效果与炎症因子表达水平的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 实验动物及细胞系：50只新西兰大耳兔均为6月龄，体重2.5～3 kg，购自宁夏医科大学实验动物中心(动物许可证号：SCXK2016-0007)，雌雄不分。实验过程中的动物相关操作符合动物伦理学要求。2018年7月-2019年9月在宁夏医科大学实验动物中心完成动物实验，在重点实验室完成实验操作。BMSCs(RBXMX-01001)购自赛业生物公司。

1.1.2 实验动物分组与造模：将50只大耳兔随机分为5组(n=10)，即：空白组(CT组)、模型组(Model组)、温针灸组(WNM组)、骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)、温针灸联合骨髓间充质干细胞组(WNM+BMSCs组)。除CT组外，采用右后肢伸直位石膏管型固定其余4组，固定6周以制备中期兔KOA模型，造模成功后，进行试验干预。

1.2 主要试剂：BMSCs完全培养基(赛业生物公司，批号：RBXMX-90011)；L-DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素、链霉素(Gibco)；ELISA 试剂盒(碧云天生物科技有限公司)；全蛋白提取试剂盒、一抗:MMP-1、MMP-13单克隆抗体(Abcam)，山羊抗兔二抗(BOSEN)；细胞培养箱(Sanyo)。

1.3 实验方法