夏文燕 蓝金花 许 荣 吕维名

（赣南医学院第一附属医院，江西赣州 341300）

脂联素是脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子，其分泌量与肥胖和胰岛素抵抗呈负相关[1]。高糖环境可诱发内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERs）[2]，损伤脂肪细胞的分泌功能。目前研究证实，黄连素是一种异喹啉类生物碱，可以改善脂联素的分泌，调节糖脂代谢[3]。但国内外尚未有关于黄连素对高糖介导的3T3-L1 脂肪细胞内质网应激对脂联素分泌的影响及具体机制的报道。本研究探讨黄连素对高糖介导的3T3-L1 脂肪细胞内质网应激对脂联素蛋白分泌的影响，并进一步探讨是否通过下调内质网应激蛋白PERK/eIF2a水平改善脂联素的可能分子机制，结果如下。

1 资料与方法

1.1 主要试剂

3T3-L1前 脂 肪 细 胞 株（American Type culture collection，ATCC）；高糖（DMEM）培养基（ DMEM 美国 GIBCO 公司）；高糖无酚红（DMEM）培养基（美国 Sigmag公司）；胎牛血清（美国 GIBCO 公司）；地塞米松（DEX，D4902）（美国 SIGMA 公司）；胰岛素（若和灵 R）（丹麦诺和诺德公司）；黄连素购于上海康九化工有限公司；葡萄糖购自北京益利精细化学品有限公司；兔抗人eIF2a 单克隆 抗体（美国BPB公司）；蛋白激酶R样内质网激酶（PERK），（1∶200稀释，美国Santa Cruz），p-PERK（1∶1 000稀释，美国Santa Cruz）及脂联素抗体（武汉博士德公司）。

1.2 方法

1.2.1 3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化 3T3-L1前脂肪细胞用10%的胎牛血清高糖DMEM培养液，在 37 ℃、7% CO2培养箱中培养。细胞融合率达到 80%～90% 时，用胰蛋白酶（0.25%）消化并传代于6孔培养板上。待细胞融合后，加含1μmol/L地塞米松和0.5 mmol/L 1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤及10μg/mL 胰岛素的DMEM培养液培养48 h；以含10μg/mL 胰岛素的DMEM培养液再培养48 h，以DMEM培养液继续培养6 d，10 d左右的诱导分化90%3T3-L1细胞呈脂肪细胞表型，细胞内见脂滴。……