高 锋，何明霞，张春霞，刘 静，许欣景，曹 旸

（1.云南省热带作物科学研究所，云南景洪666100；2.云南省景洪宏臻农业科技有限公司，云南景洪666100）

暗褐网柄牛肝菌Phlebopus portentosus（Berk.&Broomo）Boedijn，又名黑牛肝菌，隶属于担子菌门（Basidiomycota）伞菌（Agaricomycetes）牛肝菌目（Boletales）小牛肝菌科（Boletinellaceae）脉柄牛肝菌属（Phlebopus），分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚、新西兰等国家，国内的广西、海南、云南等省区都有分布［1-7］。其子实体味道鲜美，营养丰富，具有很高的经济价值。相对于其他的分子标记，SSR标记的变异速度更快，适用于食用菌生产菌株的鉴定及遗传多样性的分析。在前期的工作中，我们使用由基因组数据开发的15个SSR标记对33个生产菌株进行了鉴定，由于样品数量及采样范围的影响，仅有5个标记表现出了中度多态性特征［8］。为此，在进一步的工作中，我们扩大了SSR标记及样品的筛选范围，以期寻找到具有更好的多态性、稳定性和重复性，能够更充分反映暗褐网柄牛肝菌遗传多样性及群体遗传学特征的SSR分子标记。

1 材料和方法

1.1 样品来源

157样品来自12个地理群体，涉及云南、广西、四川三个省区，部分来自澳大利亚和新西兰。

1.2 基于基因组数据的SSR引物设计和筛选

根据文献资料，SSR单元的重复次数越高，其具有高多态性的可能越大［9］。因此，本次开发标记主要针对二碱基重复10次以上，三碱基重复7次以上，四碱基重复6次以上，五碱基重复6次以上，及六碱基重复6次以上的SSR标记，PCR产物长度小于600 bp。具体步骤如下：

a.运用MISA软件搜索SSR，以暗褐网柄……