西南民族大学 四川 成都 610000

1 简介

尽管蛋白组学出现于1990s[1],多肽组学随着质谱技术的发展,在2000s年代才初露头角[2,3]。多肽组学是综合分析细胞,组织或者器官中所有的多肽成分,在生物标志物、新药研发等多个领域具有重要意义。水蛭已经在全世界范围应用于血栓,脓肿,骨关节炎,外科微整形等领域[4],活水蛭能够吸食动物鲜血,因此研究人员从水蛭新鲜唾液腺中分离得到了一系列的抗血栓成分[5],例如Hementerin这种从H.lutzi中分离得到的由30个氨基酸组成的纤维蛋白原溶解物[6],从H.medicinalis中分离得到的具有血小板聚集抑制活性的calin[7]。从H.officinalis中分离得到的具有抑制胶原蛋白诱导的血小板聚集活性[8]。从Haementeria depressa中分离得到的lefaxin具有抑制FXa因子的作用[9]。以及具有减轻深静脉血栓,肺栓塞和静脉血栓的水蛭素。但是对于中药水蛭干燥的全体活性成分报道较少,本文报道了中药水蛭小分子多肽组学的初步研究。

2 材料与方法

2.1 粗提物的获取 将50g中药水蛭(亳门中药饮片有限公司,中国)研成粉末,用0.4L纯净水在60℃下提取12h,重复一次并合并提取液,15344g/min×10min(BECKMAN COULTER JA-14,USA)离心,取上清液冻干保存。取冻干品分别配置成20mg/ml、40mg/ml和60mg/ml浓度测定抗血小板聚集活性。

2.2 阴离子交换层析 冻干品溶解于20mM的Tris-HCl(PH8.8)缓冲液中配置成8 mg/ml的浓度,经10kDa超滤管(Millipore,USA)超滤,分子量低于10kDa的部分经High Q阴离子交换柱(2.7×10.5cm,Richmond,USA)分离纯化,线性洗脱梯度为0-0.6M NaCl,流速为6ml/min,并检测280nm处紫外吸收峰值。

2.3 反相高效液相层析 离子交换层析获得的所有组分再经过Bio-Rad(Richmond,USA)系统,汉邦Hedera ODS-2(20×250mm)反相柱获得纯度高于99%的小分子多肽组分。……