郭润发，张立新，朱文凯，周延东，毛 静，葛红山

（泰州市人民医院 生殖医学科，江苏 泰州 225300）

蛋白免疫印迹实验（Western blot）是一种通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨特异性蛋白的方法，被广泛用于检测基因表达产物或比较表达产物量的相对变化，获得高品质的蛋白样本是保证其结果准确的前提条件。目前提取蛋白所用的裂解液种类繁多，裂解时间、裂解方法等均会影响蛋白的提取效果，应用于后续的Western blot 检测时效果具有较大的差异[1]。目前实验室最常用组织细胞裂解液是经典的RIPA 裂解液，然而研究发现使用RIPA buffer 提取精子蛋白并不理想[2,3]，精子细胞是一种高度分化的细胞，精子的结构和功能都有别于其他体细胞，在其细胞内外存在着多种糖蛋白或糖复合物，它们参与精卵识别、粘附、结合以及质膜融合等受精活动，在受精过程中起着非常重要的作用[4]。但是由于精子蛋白在结构上的多型性、功能上的复杂性而且其表达量相对其他体细胞较低，选用恰当的裂解方法有效提取精子蛋白是个亟待解决的实验问题。

1 材料与方法

1.1 材料Percoll 硅胶颗粒混悬液（Solarbio）；SDS 裂解液、RIPA（强）裂解液、蛋白酶抑制剂（PMSF）、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液（碧云天)；β-actin 抗体、LonP1 抗体（Abcam）； 二抗anti-rabbit （中杉金桥）、蛋白marker 26616（Thermo）；一抗稀释液（杭州弗德生物有限公司），其他常用试剂均为国产或进口分析纯。

1.2 方法

1.2.1 精子的采集及保存在经患者同意的前提下，选取我中心就诊的男性患者，年龄位于25～35岁之间，液化正常、浓度约50×106/ml、活动率约50%，畸形率正常的100 份男性精子标本。……