张雪霁

（天津大学药物科学与技术学院，天津 300072）

巯基化合物通过氧化还原反应参与机体代谢，进而影响机体的正常生理功能，其涉及范围广，种类多，然而目前鲜少有文章系统地总结含巯基物质的定量测定方法。5-5’二硫代双（2-硝基苯甲酸）通常指总巯基检测试剂，又称作Ellman 试剂或简称为DTNB，现已成为实验室常用的一种巯基定量检测试剂。总巯基检测试剂比色法首次被Ellman 提出，又被叫做Ellman 法，Ellman［1］于1959 年成功合成DTNB，并通过光电比色法定量地测定了生物材料（血液样品）中的巯基，其简便、有效和快速的优势使得Ellman 试剂被广泛使用。在弱碱性条件下，反应物中巯基（—SH）的数量，可根据硫醇类物质的—SH 与DTNB 的二硫键快速交换释放的2-硝基-5-硫代苯甲酸二价阴离子（NTB2-）来计算，此阴离子的最大吸收波长为412 nm，其摩尔消光系数为14 150×1 000 cm2／mol。此外，随着分析技术的发展，Ellman 试剂还可以与高效液相色谱联用以实现实时监测，或者作为表面增强拉曼光谱的探针以达到增强信号的作用。笔者将对Ellman 法的反应原理、反应动力学性质进行概述，并着重介绍其应用，旨在为该方法能够更加灵活广泛地运用到相关研究中提供解决思路和参考。

1 反应原理

DTNB 与含有巯基的物质（R—SH）在弱碱性条件下反应，生成一分子NTB2-和一分子R—S—S—NTB。NTB2-显亮黄色，可通过监测412 nm波长下的吸光度根据朗伯-比耳定律进行定量。NTB2-摩尔消光系数的确定经历了20 年，最开始的摩尔消光系数ε412(13 600×1 000 cm2／mol)是由Ellman［2］将NTB2-溶解在丙酮中测量得到的。此后，有科学家采用过量的半胱氨酸、巯基乙醇和还原型谷胱甘肽与DTNB 反应［3-4］，并对ε412进行了测量，得到ε412范围为（9 500～13 100）×1 000 cm2／mol。……